E-selectin和ICAM-1在肝癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞黏附作用中的實(shí)驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC，以下簡稱肝癌）是世界范圍內(nèi)發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，每年約有100萬以上的人新患此病，它也是我國最常見且惡性程度較高的腫瘤之一。手術(shù)切除是當(dāng)前治療原發(fā)性肝癌的首選方法，然而肝癌根治術(shù)后的高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率卻是阻礙肝癌遠(yuǎn)期療效的重要因素。肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移多發(fā)生在術(shù)后1-2年，有資料表明，肝癌術(shù)后1年復(fù)發(fā)率達(dá)20%-64%；3年復(fù)發(fā)率可高達(dá)57%-81%；湯釗猷[2]等報道肝癌切除術(shù)后5年

2、復(fù)發(fā)率為61.5%，小肝癌的術(shù)后復(fù)發(fā)率為43.5%。因此，深入研究原發(fā)性肝癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的機(jī)制，并尋求有效抑制復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的治療措施已成為當(dāng)今肝癌研究中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。 腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附是腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的決定性步驟之一，其間細(xì)胞粘附分子（cellular adhesion molecule，CAM）的表達(dá)起著極為重要的作用。腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附是通過粘附分子所介導(dǎo)，內(nèi)皮細(xì)胞選擇素（E-selectin）是粘附分

3、子選擇素家族中的一員，可在激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，目前研究發(fā)現(xiàn)其配體路易斯寡糖-X（sialyl-Lewis X，sleX）和路易斯寡糖-A（（sialyl-Lewis A，sleA）強(qiáng)表達(dá)于結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌等多種腫瘤細(xì)胞表面，并已證實(shí)E-selectin通過與其配體特異性的結(jié)合在多種腫瘤的轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，甚至可以作為判斷腫瘤預(yù)后的一個特異性指標(biāo)；同時阻斷E-selectin的活性及表達(dá)的藥物可以阻斷腫瘤的轉(zhuǎn)移，也有研究證實(shí)肝癌

4、細(xì)胞表面大量表達(dá)E-selectin配體sleX和sleA。 細(xì)胞間粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是免疫蛋白超家族粘附分子之一，是目前研究較多的粘附分子，它廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和人體癌細(xì)胞表面[8]，參與許多生理和病理過程中細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)，包括腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和生長。ICAM-1的天然配體為淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1（leucocyte fun

5、ction-associated antigen-1，LFA-1）。腫瘤細(xì)胞ICAM-1的表達(dá)升高，一方面能促進(jìn)血管生成，有利于腫瘤細(xì)胞的生長，另一方面可以使淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞識別癌細(xì)胞的能力降低，參與腫瘤逃避免疫監(jiān)視。血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1（soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1）亦可通過促進(jìn)腫瘤血管的生成和逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視作用，而在腫瘤生長中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)

6、，大腸癌細(xì)胞表面ICAM-1的過度表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。白血病細(xì)胞表面ICAM-1的表達(dá)與其向血管外滲出和疾病進(jìn)展有關(guān)，抗ICAM-1 mAb可抑制這種滲出。胃癌細(xì)胞表面高表達(dá)ICAM-1分子，其產(chǎn)生的sICAM-1可促進(jìn)癌細(xì)胞的血源性轉(zhuǎn)移[10]。原發(fā)性肝癌患者血清sICAM-1水平在一定程度上可以反映肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移情況及治療效果，有可能成為預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及療效的指標(biāo)。孫婧景等的研究[11，12，13]表明ICAM-1的高表達(dá)

7、與肝癌高轉(zhuǎn)移特性有關(guān)，抗粘附治療可能是防治腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的一個新方向。 依據(jù)以上特點(diǎn)，我們設(shè)想：肝癌細(xì)胞可能通過分泌促進(jìn)E-selectin和ICAM-1等粘附分子表達(dá)的物質(zhì)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞，而激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞通過E-selectin和ICAM-1等粘附分子與其配體sleX或sleA和LFA-1等發(fā)生特異性結(jié)合，使肝癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞粘附，最終導(dǎo)致肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此通過阻斷E-selectin和ICAM-1等粘附分子的表達(dá)可能抑

8、制肝癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，從而有望達(dá)到阻斷肝癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的目的。 目的： 研究E-selectin和ICAM-1在肝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ED25和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304上的表達(dá)，探討E-selectin和ICAM-1在肝癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞黏附中的作用，并篩選有臨床應(yīng)用前景的、預(yù)防肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的抗黏附藥物。 方法： 實(shí)時熒光定量PCR檢測E-selectin和ICAM-1在肝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ED25和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

9、ECV304上的表達(dá)，應(yīng)用體外粘附實(shí)驗檢測肝癌細(xì)胞HepG2與活化的ED25和ECV304的粘附，最后粘附阻斷實(shí)驗測試不同藥物對肝癌細(xì)胞與肝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附阻斷的作用。 結(jié)果： E-selectin和ICAM-1高表達(dá)于活化后的ED25和ECV304，且能介導(dǎo)HepG2與ED25和ECV304的粘附。地塞米松、丹參酮ⅡA在黏附阻斷實(shí)驗設(shè)定的濃度下對ED25和HepG2均無細(xì)胞毒作用，地塞米松、丹參酮ⅡA具有較強(qiáng)的抗黏附