北極狐ESR和FSHR基因多態(tài)性、表達(dá)及其與產(chǎn)仔關(guān)系的研究.pdf

1、學(xué)位論文學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：B13032北極狐ESR和FSHR基因多態(tài)性、表達(dá)及其與產(chǎn)仔關(guān)系的研究黃賀指導(dǎo)教師姓名：李和平教授東北林業(yè)大學(xué)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士學(xué)科專業(yè)：野生動(dòng)植物保護(hù)與利用論文提交日期：2013年3月論文答辯日期：2013年6月授予學(xué)位單位：東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾多厶櫛素大學(xué)摘要摘要產(chǎn)仔數(shù)是養(yǎng)狐業(yè)的一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性狀，提高產(chǎn)仔數(shù)可以減少種狐飼養(yǎng)數(shù)量，降低生產(chǎn)成本，增加皮張產(chǎn)量，給養(yǎng)狐

2、業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益：同時(shí)，提高產(chǎn)仔數(shù)也是北極狐育種工作的主要目標(biāo)。北極狐的產(chǎn)仔性狀是遺傳力低的數(shù)量性狀，采用常規(guī)的育種方法難以在短期內(nèi)取得較大的遺傳進(jìn)展，而分子標(biāo)記輔助選擇(MAS)為顯著改良產(chǎn)仔數(shù)性狀提供了有效途徑。到目前為止，ESR基因和FSHR基因與產(chǎn)仔性狀的關(guān)系已經(jīng)基本明確，并且在多種動(dòng)物中進(jìn)行了大量的研究，但是關(guān)于ESR基因和FSHR基因與北極狐產(chǎn)仔數(shù)關(guān)系的研究未見報(bào)道。因此，本研究以FSHR基因和ESR基因作為北極狐高產(chǎn)仔

3、性狀的候選基因，采用PCR技術(shù)對(duì)FSHR基因和ESR基因進(jìn)行克隆測(cè)序，獲得FSHR基因和ESR基因序列并進(jìn)行序列分析和同源性比較；采用PCRRFLP技術(shù)和PCRSSCP技術(shù)對(duì)FSHR基因和ESR基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，對(duì)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序和序列分析，確定變異類型，并將多態(tài)位點(diǎn)與北極狐的產(chǎn)仔數(shù)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析；采用realtimePCR技術(shù)研究不同F(xiàn)SHR基因和ESR基因型卵巢組織中FSHR和ESR的表達(dá)量及其對(duì)產(chǎn)仔數(shù)的影響；采用realtim

4、ePCR技術(shù)和免疫組化技術(shù)研究FSHR基因在北極狐發(fā)情周期卵巢中的表達(dá)規(guī)律，并對(duì)FSHR基因表達(dá)進(jìn)行定位。研究結(jié)果如下：(1)北極狐ESR基因全長(zhǎng)1824bp，包含ATG起始密碼子，開放讀碼框編碼607個(gè)氨基酸，序列中的A、T、G、C比例分別為2523％、2269％、2592％、2616％，G屺含量(5208％)高于AT的含量(4792％)。DNA結(jié)合區(qū)存在八個(gè)保守的半胱氨酸殘基(C)，構(gòu)成兩個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)(ZnC4)，Dbox(EGCKA

5、)、Pbox(PATNQ)，還存在一核定位信號(hào)(aa244250)DRNRRKS。(2)北極狐FSHR基因序列長(zhǎng)1947bp，包含ATG起始密碼子，可編碼648個(gè)氨基酸，序列中的A、T、G、CLLffIJ分別為2517％、2655％、2142％、2686％，G屺含量(4828％)低于AT的含量(5172％)。(3)北極狐ESR基因的氨基酸序列與雞、小鼠、羊、牛、人、豬的同源性分別為74％、77％、87％、88％、85％、89％，在進(jìn)化關(guān)

6、系上北極狐與豬的親緣關(guān)系較近，與雞最遠(yuǎn)，氨基酸組成分析表明絲氨酸含量最高，色氨酸含量最低。(4)北極狐FSHR基因的氨基酸序列與雞、小鼠、羊、牛、人、豬的同源性分別為59％、73％、83％、83％、82％、84％，在進(jìn)化關(guān)系上北極狐與人的親緣關(guān)系較近，與雞最遠(yuǎn)，氨基酸組成分析表明絲氨酸含量最高，酪氨酸含量最低。(5)北極狐E娘蛋白在5660、88～89、108121、154172、198205、215~220、238239，263266