川芎嗪二苯甲基哌嗪對血管性癡呆大鼠的作用研究.pdf

1、血管性癡呆是由于腦血管疾病和心血管病變的因?yàn)閷?dǎo)致的獲得性、持續(xù)性智能障礙綜合征,是老年性癡呆中最常見的類型之一,僅次于AD。目前。VD的治療主要針對供血不足、缺血半暗帶的腦細(xì)胞,通過改善腦循環(huán)和腦細(xì)胞供氧預(yù)防新血栓形成與再梗死,常用的治療藥物有腦循環(huán)改善劑、腦能量代謝激活劑、促進(jìn)膽堿能系統(tǒng)的藥物,從治療的角度來看,沒有突破性進(jìn)展。神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的恢復(fù)是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多層面的系統(tǒng)整體調(diào)節(jié)過程。積極探索促進(jìn)認(rèn)知功能恢復(fù)的治療策略,仍是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

2、和臨床醫(yī)學(xué)的一個(gè)重大課題。
　　 川芎嗪是中藥川芎的主要有效成分之一,具有清除氧自由基、鈣拮抗、擴(kuò)血管、抗血小板聚集和血栓形成等多種作用,廣泛應(yīng)用于臨床治療。但川芎嗪分子中的甲基易被氧化,生成極性和水溶性較大的代謝物而迅速被排出體外,所以川芎嗪存在半衰期短,生物利用度低等缺點(diǎn)。本課題選用的化合物川芎嗪二苯甲基哌嗪(TMPDP),是以氟桂利嗪的主要藥效基團(tuán)二苯甲基-1-哌嗪基甲基基團(tuán)取代川芎嗪的藥代基團(tuán)2位甲基而合成出的新型川芎嗪

3、烴基哌嗪類衍生物。氟桂利嗪為第2代哌嗪類鈣拮抗藥,能通過血腦屏障,選擇性擴(kuò)張血管,預(yù)防缺血、缺氧引起的細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載所致細(xì)胞損害,臨床上廣泛用于心腦血管疾病和外周血管功能不全的防治。以氟桂利嗪的活性基團(tuán)取代川芎嗪分子的藥代基團(tuán),以期克服川芎嗪體內(nèi)半衰期短、生物利用度低等缺點(diǎn),并通過協(xié)同作用增強(qiáng)藥效,提高抗心腦血管疾病作用。
　　 本論文的第一部分,在細(xì)胞水平采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)觀察化合物對不同損傷機(jī)制造成的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

4、；第二部分,在動(dòng)物水平采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎并降壓的方法制作大鼠血管性癡呆模型觀察化合物對血管性癡呆大鼠的保護(hù)作用,為進(jìn)一步將TMPDP開發(fā)為具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗血管性癡呆藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 1 TMPDP對KCL損傷SH-SYSY細(xì)胞活力的影響
　　 采用MTT法檢測細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)KCL(240mmol·L-1)損傷后,細(xì)胞活力明顯降低(P<0.01)。而同時(shí)給予TMPDP后,4

5、0,80μmol/L兩個(gè)劑量組均可明顯抑制KCL對神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度(P<0.05)。
　　 2 TMPDP對L-Glu損傷SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響
　　 采用MTT法檢測細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)L-Glu(3000μmol·L-1)后,細(xì)胞活力明顯降低(P<0.01)。而同時(shí)給予TMPDP后,20,40gmol/L兩個(gè)劑量組均可明顯抑制Glu對神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度(P<0.01)。
　　

6、3 TMPDP對NaN3損傷SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響
　　 采用MTT法檢測細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)NaN3(64mmol·L-1)損傷后,細(xì)胞活力明顯降低(P<0.01)。而同時(shí)給予TMPDP后,40,80gmol/L兩個(gè)劑量組均可明顯抑制NaN3對神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度(P<0.01)。
　　 4 TMPDP對血管性癡呆模型大鼠行動(dòng)能力的影響
　　 采用低血壓反復(fù)夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈4周造成血

7、管性癡呆大鼠模型。前肢抓握實(shí)驗(yàn)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的檢查動(dòng)物行動(dòng)能力的實(shí)驗(yàn)方法。手術(shù)后第30日經(jīng)行前肢抓握實(shí)驗(yàn)用以檢測實(shí)驗(yàn)大鼠行動(dòng)能力,并進(jìn)行評分。結(jié)果表明:反復(fù)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈后,動(dòng)物的行動(dòng)能力有所降低,給予TMPDP治療后,動(dòng)物行動(dòng)能力評分明顯提高(P<0.05)。
　　 5 TMPDP對血管性癡呆模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響
　　 本實(shí)驗(yàn)采用Morris水迷宮檢測大鼠的空間記憶能力,包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩項(xiàng)

8、檢測指標(biāo)。在定位航行實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠測試成績最差,逃避潛伏期比假手術(shù)組明顯延長(P<0.01)；另外空間探索實(shí)驗(yàn)中,穿越平臺(tái)次數(shù)和在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間均顯著減少(P<0.01),表明雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎造成大鼠腦慢性缺血,4周后模型大鼠已出現(xiàn)顯著的學(xué)習(xí)記憶能力損害。給予80mg/kgTMPDP后,大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期明顯降低,空間探索實(shí)驗(yàn)中,穿越平臺(tái)次數(shù)和在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間均顯著增高(P<0.01)。
　　 6 TMP

9、DP對血管性癡呆模型大鼠腦內(nèi)谷氨酸含量的影響
　　 收集實(shí)驗(yàn)大鼠腦組織勻漿,用考馬斯亮藍(lán)法測定細(xì)胞內(nèi)總蛋白量,按谷氨酸含量檢測試劑盒說明書測定組織谷氨酸含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)結(jié)扎并降壓后,大鼠腦組織勻漿中谷氨酸含量明顯升高(P<0.01)。與模型組相比,20、80mg/kg TMPDP能夠顯著降低腦組織中谷氨酸含量(P<0.05)。
　　 7 TMPDP對血管性癡呆模型大鼠腦內(nèi)MDA、GSH含量和SOD活性

10、的影響
　　 收集實(shí)驗(yàn)大鼠腦組織勻漿,用考馬斯亮藍(lán)法測定細(xì)胞內(nèi)總蛋白量,按MDA、GSH含量檢測試劑盒說明書測定組織MDA、GSH含量,按SOD活性檢測試劑盒說明書測定組織SOD活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)結(jié)扎并降壓后,大鼠腦組織勻漿中MDA含量明顯升高(P<0.01)；SOD活性和GSH含量明顯降低(P<0.01)。與模型組相比,20、80mg&g TMPDP能夠降低腦組織中MDA含量(P<0.01),80mg/kgT

11、MPDP能夠升高組織SOD活性和GSH含量(P<0.01)。
　　 8 TMPDP對血管性癡呆模型大鼠腦內(nèi)NO含量及NOS活性的影響
　　 收集實(shí)驗(yàn)大鼠腦組織勻漿,用考馬斯亮藍(lán)法測定細(xì)胞內(nèi)總蛋白量,按NO含量檢測試劑盒說明書測定組織NO含量,按NOS活性檢測試劑盒說明書測定組織NOS活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)結(jié)扎并降壓4周后,大鼠腦組織勻漿中NO含量和NOS活性無顯著變化(無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。
　　 9 T