番茄紅素對血管性癡呆大鼠的抗凋亡作用.pdf

1、目的:
　　血管性癡呆（Vascular dementia，VD）是指由于各種腦血管因素（如缺血、出血、急慢性腦供血障礙等）引起腦組織損傷后導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙和記憶力下降的一種臨床綜合征。缺血性腦血管病在血管性癡呆的發(fā)病原因中居首位。近年，隨著人口老齡化的進程，腦卒中和心血管疾病的發(fā)病率持續(xù)上升，血管性癡呆的患病率也隨之增高，但其確切的發(fā)病機制仍未闡明。目前認(rèn)為氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸毒性、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等共同參與血管性癡呆的發(fā)生

2、發(fā)展。
　　細(xì)胞凋亡（Apoptosis）為細(xì)胞的程序性死亡，是細(xì)胞受到傷害性刺激因素導(dǎo)致細(xì)胞死亡的重要機制。細(xì)胞凋亡分為外源性途徑和內(nèi)源性途徑，外源性凋亡途徑，即死亡受體途徑，經(jīng)Fas蛋白與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合并激活，招募位于細(xì)胞內(nèi)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase），啟動細(xì)胞凋亡；內(nèi)源性凋亡途徑，即線粒體途徑，內(nèi)外刺激使線粒體膜的通透性增強，引起細(xì)胞色素C的釋放，其與凋亡激活因子1（Apaf-1）形成復(fù)合體，啟動凋亡程序。

3、Caspase9和caspase3是凋亡途徑級聯(lián)反應(yīng)鏈上的關(guān)鍵性生物分子。Caspase3通過切割多聚ADP核糖聚合酶（PARP）等引起DNA損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
　　番茄紅素（Lycopene，LP）是一種高度不飽和的脂溶性色素，廣泛存在于番茄、西瓜等蔬菜水果中。番茄紅素具有強大的抗氧化能力，能夠清除過多的氧自由基，抵抗衰老、增強人體免疫力、減少心腦血管疾病發(fā)生、抑制腫瘤生長等。近年來，多項有關(guān)番茄紅素在腦血管病方面作用的研

4、究表明，番茄紅素可通過其強大的抗氧化作用對腦血管起到保護作用。但番茄紅素是否可通過抗細(xì)胞凋亡發(fā)揮腦保護作用鮮有報道。本實驗通過結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈法(2-VO)制備血管性癡呆動物模型，應(yīng)用番茄紅素進行干預(yù)，觀察番茄紅素對血管性癡呆大鼠行為認(rèn)知功能及海馬CA1區(qū)凋亡指標(biāo)caspase9、caspase3表達水平的影響。
　　方法：
　　對2月齡健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠進行雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎制備血管性癡呆動

5、物模型。假手術(shù)組10只，只分離頸部肌肉，暴露血管，不結(jié)扎動脈。將手術(shù)后存活動物按照癡呆動物標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，符合標(biāo)準(zhǔn)的動物隨機分為模型組、番茄紅素組，每組約10只。番茄紅素組大鼠每日給予番茄紅素10mg/kg，模型組和假手術(shù)組大鼠給予等容量植物油，持續(xù)給藥6周。干預(yù)結(jié)束后，行水迷宮實驗，測定各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺的次數(shù)。后留取大鼠海馬組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法（Immunohistochemistry）和免疫印跡法（Western b

6、lot）測定海馬CA1區(qū)caspase3、caspase9的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1番茄紅素對血管性癡呆大鼠的行為學(xué)影響
　　水迷宮定位航行實驗結(jié)果表明，三組大鼠的逃避潛伏期從第2天開始均較前1天縮短，表明三組大鼠都有一定的學(xué)習(xí)能力，但同時三組大鼠之間的學(xué)習(xí)能力又有一定的差別，三組大鼠之間的逃避潛伏期有顯著差異（P<0.05）。模型組與假手術(shù)組相比，前4天的逃避潛伏期明顯延長（P<0.05）；番茄紅素組與模型組相

7、比，前4天的逃避潛伏期明顯縮短（P<0.05）；番茄紅素組與假手術(shù)組相比，前4天的逃避潛伏期延長（P<0.05）。
　　第5天進行穿越平臺次數(shù)實驗，穿越平臺次數(shù)的多少與大鼠的記憶功能有關(guān)，穿越平臺次數(shù)越多說明大鼠的記憶能力越好。模型組與假手術(shù)組相比，穿越平臺次數(shù)明顯減少（P<0.05）；番茄紅素組與模型組相比，穿越平臺次數(shù)明顯增多（P<0.05）；番茄紅素組與假手術(shù)組相比，穿越平臺次數(shù)減少，但無顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

8、r>　　2海馬CA1區(qū)caspase3、caspase9表達水平western blot結(jié)果
　　大鼠海馬CA1區(qū)caspase3、caspase9表達情況：模型組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬CA1區(qū)caspase3、caspase9蛋白表達水平明顯增加（P<0.05）；番茄紅素組與模型組相比，海馬CA1區(qū)caspase3、caspase9蛋白表達水平明顯減少（P<0.05）；番茄紅素組與假手術(shù)組相比，凋亡蛋白表達水平增加，但無明顯統(tǒng)

9、計學(xué)差異（P>0.05）。
　　3海馬CA1區(qū)caspase3免疫組織化學(xué)結(jié)果
　　大鼠海馬CA1區(qū)caspase3蛋白的免疫組化結(jié)果：模型組與假手術(shù)組相比，海馬神經(jīng)元萎縮，caspase3蛋白表達陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加（P<0.05）；番茄紅素組與模型組相比， caspase3蛋白表達陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.05）；番茄紅素組與假手術(shù)組相比，caspase3蛋白表達陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加（P<0.05）。
　　結(jié)論：