TNFAIP8家庭在糖尿病腎病中的表達及作用機制.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常見的并發(fā)癥,也是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭和糖尿病死亡的重要原因之一,因此防治糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展具有極其重要的意義。腎纖維化和慢性腎功能衰竭是糖尿病腎病的基本病理改變,但糖尿病腎病的發(fā)病機制復(fù)雜,到目前為止尚未完全明了。近年的研究表明,自身免疫與炎癥是糖尿病腎病的主要發(fā)病機制之一,這一通路涉及到免疫細胞的浸潤、炎性介質(zhì)的分泌、細胞因子的產(chǎn)生、細胞外基質(zhì)的增多和腎臟固

2、有細胞的損傷等一系列相互關(guān)聯(lián)的過程。
　　 TNF-α誘導(dǎo)蛋白8(TNFAIP8)家族是最近新發(fā)現(xiàn)的一組具有高度同源性序列的蛋白,在維持細胞穩(wěn)態(tài)和自身免疫調(diào)節(jié)方面具有重要作用,該家族包括TNFAIP8、TIPE1、TIPE2和TIPE3四個家庭成員。糖尿病腎病的發(fā)病機制復(fù)雜,有關(guān)TNFAIP8家族在腎臟中的表達及在糖尿病腎病中的作用,迄今尚未見報道。因此,本研究課題將對TNFAIP8家族各個成員在腎臟中的表達情況及它們在糖尿病腎

3、病發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮的作用進行探討。
　　 方法:一、體內(nèi)試驗:雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分為對照組和糖尿病動物模型組。通過尾靜脈注射鏈脲佐菌素streptozotocin(STZ,50mg/kg)誘導(dǎo)成模。飼養(yǎng)12周后,進行尿白蛋白含量的測定和HE染色確定腎臟損傷程度、制作腎組織切片用免疫組化檢測TNFAIP8家族的分布、取腎皮質(zhì),分離和提取RNA和蛋白用實時定量RT-PCR,Western blot檢測TN

4、FAIP8家族表達的變化、測定NADPH氧化酶的活性。
　　 二、體外實驗:在腎小球系膜細胞(glomerular mesangial cells,MC)和足細胞(podocytes,PC)中測定TNFAIP8家族的表達和變化以及細胞的增殖情況。
　　 三、收集糖尿病腎病患者的腎活檢標本,通過實時定量RT-PCR和免疫組化實驗方法表征TNFAIP8家族成員在腎臟中的表達和變化。
　　 結(jié)果:在糖尿病大鼠模型中,發(fā)

5、現(xiàn)NADPH氧化酶活性和炎癥因子TNF-α表達量的增高;通過實時定量RT-PCR和Western blot分析,TNFAIP8家族的四個成員在正常腎臟中均有表達,特別是TNFAIP8和TIPE2在STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型的腎皮質(zhì)中表達量顯著增加,而且這種表達量的增加在臨床糖尿病腎病病人的腎活檢樣本中也得到了確認。在體外實驗中,MC在高糖或TNF-α的刺激下均誘導(dǎo)TNFAIP8的表達,而NADPH氧化酶的抑制劑可以阻斷高糖或TNF-α引

6、起的TNFAIP8的表達上調(diào)。而這些變化在PC中沒有觀測到。同時,無論是MC還是PC在高糖刺激下,均未檢測到TIPE2表達量的上調(diào)。
　　 結(jié)論:在TNFAIP8家族的四個成員中,TNFAIP8和TIPE2在糖尿病大鼠模型與臨床糖尿病腎病病人中的表達量較正常均增加,提示它們可能參與了DN的發(fā)生發(fā)展;TNFAIP8表達量的增加與MC在高糖刺激下出現(xiàn)的細胞增殖現(xiàn)象之間存在直接相關(guān)的關(guān)系;而且,這二者之間的調(diào)節(jié)可能是通過NADPH氧化