Gankyrin對甲狀腺乳頭狀癌生物學行為的影響及機制研究.pdf

1、甲狀腺癌是最常見的內分泌系統(tǒng)腫瘤，近20年來呈不斷上升的趨勢。甲狀腺乳頭狀癌(PTC)是甲狀腺癌最為常見的類型，占所有甲狀腺癌的80-90％。盡管PTC因分化程度高、生長緩慢而預后良好，但是腫瘤因受到包膜外生長、淋巴結轉移及年齡、性別等多種危險因素的影響，仍有10％的病人因復發(fā)和/或遠處轉移而預后較差。部分遠處轉移的病人由于喪失了攝碘能力而失去碘131治療的機會，10年生存率不到10％。因此探索一些新的潛在的PTC發(fā)生發(fā)展的分子機制是十

2、分有必要的。
　　Gankyrin又稱為PSMD10、p28Gank、Nas6p，屬于錨蛋白家族成員，是26S蛋白酶體19S調節(jié)顆粒的一個非催化亞基，2000年Higashitsuji在肝癌組織發(fā)現其癌基因的角色并命名為Gann ankyrin repeats（gann在日語的意思是cancer）Gankyrin可以通過與依賴性蛋白激酶(CDK)及鼠雙微體基因表達蛋白MDM2相結合負性調控抑癌蛋白p53和RB從而促進腫瘤細胞增殖，

3、抑制其凋亡。此外，Gankyrin可以與NF-κ B等炎癥因子相互作用，提示其在炎癥免疫反應中亦扮演著重要的角色。據報道Gankyrin在多種消化道腫瘤及乳腺癌、神經膠質瘤、脂肪肉瘤等腫瘤中表達異常增高，并與原發(fā)腫瘤的大小、TNM分期、腫瘤轉移及預后有關。關于Gankyrin在PTC的研究目前尚未見相關報道。
　　目的：
　　檢測Gankyrin在PTC、橋本氏甲狀腺炎(HT)及正常甲狀腺組織的表達情況并探討Gankyrin

4、蛋白表達與PTC臨床病理特征的關系;分析Gankyrin在PTC及HT同向改變的意義，為兩種疾病的關系提供新的證據;觀察Gankyrin沉默后對PTC細胞增殖及遷移的影響并分析其可能的分子機制。
　　方法：
　　1、甲狀腺不同組織標本取自臺州市立醫(yī)院腫瘤外科，術中切取0.5cm以上新鮮標本一半置于10％的甲醛固定，一半放于-80℃冰箱冰凍保存。人甲狀腺乳頭狀癌細胞株CGTHW-3購買于ATCC。
　　2、實時熒光定量P

5、CR(Real-t ime PCR)、Western blot和免疫組化檢測Gankyrin在PTC、HT及正常甲狀腺組織的表達情況并分析其與PTC臨床病理特征的關系。
　　3、脂質體法將Gankyrin干擾序列轉入細胞株CGTHW-3，熒光顯微鏡下判斷大致轉染效率，并采用熒光定量PCR及western-blot檢測干擾效果。
　　4、CCK8及平板克隆形成實驗檢測Gankyrin沉默后對PTC細胞增殖的影響
　　5、

6、采用細胞劃痕及transwell實驗檢測Gankyrin對PTC細胞遷移的影響。
　　6、Western blot檢測Gankyrin沉默后對p53、PI3K/AKT/PTEN信號通路蛋白表達的影響。
　　結果：
　　1、Western-blot及Real-time PCR實驗結果顯示Gankyrin在PTC及HT組織中mRNA及蛋白水平的表達量均高于正常對照組（P＜0.01）;而PTC組及HT組間的表達無統(tǒng)計學差異（

7、P＞0.05）;
　　2、免疫組化結果表明Gankyrin在甲狀腺乳頭狀癌組織及橋本氏甲狀腺炎的的陽性表達率分別為85.2％、80.8％，明顯高于正常甲狀腺組的陽性表達率(14.5％)。臨床特征分析表明Gankyrin蛋白表達在PTC中的表達與患者的性別、年齡、TNM分期等無關，而與是否合并HT有關。
　　3、轉染24小時后熒光倒置顯微鏡下觀察熒光發(fā)光情況，實驗結果顯示轉染效率高于85％。SiRNA干擾后，與空白組及無關序列

8、組相比，Gankyrin在CGTHW-3細胞中的mRNA及蛋白表達均明顯下調（p＜0.05）。
　　4、CCk8及平板克隆形成實驗結果表明Gankyrin基因沉默后CGTHW-3活細胞數目及平板克隆形成能力明顯低于無關序列組（P＜0.05）。
　　5、細胞劃痕實驗及transwell遷移實驗表明干預Gankyrin表達后CGTHW-3細胞愈合及穿膜能力均明顯下調（P＜0.05)。
　　6、Western-blot結果提

9、示下調Gankyrin在CGTHW-3細胞的表達后BCL-2、PIG3、PI3K p110a亞基的蛋白表達及AKT磷酸化水平均明顯下調，而抑癌蛋白p53及PTEN的表達則明顯升高（P＜0.05）。
　　結論：
　　Gankyrin在PTC組織中表達高于正常甲狀腺組織，gankyrin沉默可以抑制PTC細胞的增殖及遷移證明Gankyrin在PTC中充當癌基因的角色。分子機制研究表明Gankyrin可能部分通過調控p53、PI3