表皮生長因子受體在缺血再灌注性心律失常和腎性高血壓中的作用及其機(jī)制.pdf

1、第一部分、表皮生長因子受體在大鼠急性心肌缺血再灌注性心律失常中的作用及其機(jī)制
　　 目的：表皮生長因子受體（EGFR）屬于受體型酪氨酸激酶，對于胚胎期心臟的發(fā)育及維持成體心臟的功能方面都具有重要的意義。既往研究提示EGFR可能參與調(diào)控心肌細(xì)胞的電興奮性。本研究旨在觀察EGFR活化是否介導(dǎo)了大鼠急性心肌缺血再灌注性心律失常的發(fā)生，并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法：采用結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支法建立急性在體心肌缺血再灌注損

2、傷模型，監(jiān)測缺血再灌注過程中室性心律失常（室速、室顫等）的發(fā)生情況，檢測此過程中心肌EGFR蛋白及磷酸化水平、主要離子通道蛋白及其酪氨酸磷酸化水平的變化，并觀察EGFR表達(dá)下調(diào)后再灌注性心律失常的發(fā)生率。
　　 結(jié)果：①大鼠在體心肌缺血10min后再灌注性心律失常的發(fā)生率較高，以再灌注1~5min 最為明顯。②Western Blot 結(jié)果顯示，心肌EGFR的磷酸化水平在缺血期和再灌注早期升高。③EGFR siRNA心肌轉(zhuǎn)染下調(diào)

3、EGFR mRNA和蛋白表達(dá)的同時減少了再灌注誘導(dǎo)的室顫的發(fā)生率。④免疫沉淀及Western Blot 結(jié)果顯示，缺血再灌注過程中心肌鉀通道蛋白Kir2.1和Kv4.2的酪氨酸磷酸化水平無明顯變化，而鈉通道蛋白（NaV1.5）和L 型鈣通道蛋白（Cav1.2a）的酪氨酸磷酸化水平在缺血和再灌注早期顯著升高，其變化趨勢與磷酸化EGFR 水平較為一致；EGFR特異性抑制劑AG556 預(yù)處理能拮抗上述兩種通道磷酸化水平的升高。⑤AG556 預(yù)

4、處理可顯著降低再灌注性心律失常的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，改善血流動力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)論：EGFR在心肌缺血再灌注性心律失常的發(fā)生中起著重要的作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)心肌鈉通道和L 型鈣通道蛋白的酪氨酸磷酸化有關(guān)。
　　 第二部分、表皮生長因子受體在腎性高血壓大鼠心血管重構(gòu)中的作用及其機(jī)制
　　 目的：高血壓心血管重構(gòu)是導(dǎo)致高血壓急性心血管事件的獨(dú)立危險因素。表皮生長因子受體（EGFR）是一種受體型酪氨酸激酶，參與調(diào)節(jié)多

5、種重要的細(xì)胞功能。既往研究表明EGFR在促進(jìn)心肌肥大、血管平滑肌細(xì)胞增殖中發(fā)揮了重要作用。本實(shí)驗(yàn)擬觀察EGFR是否參與了腎性高血壓心血管重構(gòu)，并初步探討其參與機(jī)制，為臨床防治腎性高血壓心血管重構(gòu)尋找合適的靶點(diǎn)。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的“兩腎一夾”（2K1C）Goldblatt 腎性高血壓大鼠模型，觀察血壓、左室重量指數(shù)、組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)和免疫印跡檢測血管和心肌EGFR的表達(dá)以及主要的下游信號分子細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激

6、酶（ERK）磷酸化水平的改變。
　　 結(jié)果：①術(shù)后2周2K1C 大鼠收縮壓急劇升高，術(shù)后3周趨于穩(wěn)定，至6周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時血壓維持在150 mmHg以上，表明2K1C 腎性高血壓大鼠模型建立成功。②高血壓大鼠左室重量指數(shù)明顯大于假手術(shù)組（P＜0.05），心肌Masson 染色顯示間質(zhì)及血管周圍的膠原增生明顯。③高血壓大鼠胸主動脈免疫組化和心肌Western Blot 結(jié)果均顯示，EGFR表達(dá)增強(qiáng)并伴ERK的磷酸化水平升高，與高血壓