外源性膽紅素在大鼠腎缺血再灌注中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：本研究通過復(fù)制大鼠腎缺血再灌注模型，探索外源性膽紅素在大鼠腎缺血再灌注過程中是否具有抗氧化損傷的保護作用及其作用機制，并探討該作用與膽紅素劑量之間是否存在劑量依賴關(guān)系。 方法：60只健康雄性Wistar大鼠隨機分為10小組，(1)假手術(shù)組(n=12)，按縫合切口后12小時、24小時兩個取樣時間點分為兩小組，即假手術(shù)后12小時組、24小時組，每組6只；(2)缺血再灌注模型組(模型組)(n=12)，按再灌注后12小時、24小時

2、兩個時間點分為兩小組，即缺血再灌后12小時、24小時組，每組6只；(3)膽紅素處理組(BR組)(n=36)，按不同劑量組及處理時間的不同細分為2.5μmolBR再灌注后12小時組、24小時組，5μmolBR再灌注后12小時組、24小時組，10μmolBR再灌注后12小時、24小時組，共六小組，每組6只。各組動物按35～40mg/kg的劑量從腹腔注射3％的戊巴比妥鈉麻醉后開腹，假手術(shù)組切除右腎，只模擬模型組分離左腎動脈但不夾閉，45分鐘后

3、縫合切口；模型組和膽紅素處理組均切除右腎，分離左腎動脈并夾閉，45分鐘后松開動脈夾行再灌注并縫合切口。假手術(shù)組和模型組在再灌前從腎靜脈注射與膽紅素處理組相同容量(1ml)的溶劑，膽紅素處理組在再灌前即刻從腎靜脈注射相同容量(1ml)不同劑量的膽紅素溶液。各組按相應(yīng)時間點在再灌后12小時或24小時從下腔靜脈取血2.5ml，測血尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)，同時取左腎組織0.5g迅速冷凍在低溫冰箱中，做成勻漿后測定超氧化物歧化酶(sup

4、eroxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和總抗氧化能力(totalanti-oxidationcapacity，T-AOC)。取12小時、24小時兩個時間組的腎組織用10％的甲醛固定，制備石蠟切片，HE染色后觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：1、腎功能改變與假手術(shù)組即正常對照組相比：缺血再灌注12h模型組、24h模型組BUN和Cr含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05

5、)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組BUN和Cr含量均顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理24h組Cr含量顯著高于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理相同時間組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組的BUN和Cr含量均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與相同處理時間組相比，5BR處理12h、24h組的BUN和Cr含量含量均最低。不同時間

6、組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的BUN和Cr含量均較缺血再灌注12h模型組顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組的BUN和Cr含量均較12h組顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 2、腎組織各項生化檢測指標改變2.1T-AOC檢測結(jié)果：與假手術(shù)組即正常對照組相比：缺血再灌注12h與24h模型組、2.5BR與10BR處理12h、24h組的T-AOC活力均顯著降低

7、，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；5BR處理12h、24h組T-AOC活力均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組T-AOC活力均顯著增強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理12h組T-AOC活力顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組T-AOC活力均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)

8、意義(P＜0.05)；其中與相同處理時間組相比，5BR處理12h、24h組的T-AOC活力均最高。不同時間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的T-AOC活力較12h組顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；5BR處理24h組T-AOC活力較12h組顯著增強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2.2SOD活力比較：與假手術(shù)組即正常對照組相比：缺血再灌注12h、24h模型組SOD活力均顯著降低，差異具有統(tǒng)

9、計學(xué)意義(P＜0.05)；2.5BR與10BR處理12h、24h組的SOD活力均低于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但5BR處理12h、24h組SOD活力與假手術(shù)相同時間組相比，差異無顯著性，不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組SOD活力均顯著增強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但10BR處理12h、24h組SOD活力與模型組相同時間組比較，差異無顯著性，不具有統(tǒng)計學(xué)

10、意義(P＞0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組SOD活力均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；其中與相同處理時間組相比，5BR處理12h、24h組SOD活力均最高。不同時間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組及10BR處理24h組的SOD活力較12h組顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2.3MDA含量比較與假手術(shù)組即正常對照組相比：缺血

11、再灌注12h、24h模型組及10BR處理12h、24h組的MDA含量均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組比較：2.5BR、5BR處理12h、24h組MDA含量均顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組與缺血再灌注24h模型組比較MDA含量升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量BR處理組之間比較：2.5BR、5BR及10BR處理12h、24h組MDA含量均有顯著差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)

12、意義(P＜0.05)；其中與相同處理時間組相比，5BR處理12h、24h組MDA含量均最低。不同時間組之間(即24h組與12h組之間)比較：缺血再灌注24h模型組的MDA含量較缺血再灌注12h模型組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；10BR處理24h組MDA含量較12h組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 3、腎組織學(xué)變化比較：模型組與假手術(shù)組比較，缺血再灌注后12h組腎小球結(jié)構(gòu)改變不明顯，24h組球囊間隙增寬；

13、腎小管損傷改變較重，小管上皮變性脫落，管腔擴張，腔內(nèi)可見管型；腎間質(zhì)炎性細胞浸潤明顯。與模型組比較，2.5BR和5BR處理12h和24h組腎組織損傷均減輕。 結(jié)論：1、外源性膽紅素可能通過增強組織T-AOC和SOD活性提高大鼠腎組織的抗氧化應(yīng)激的能力，清除大鼠腎組織內(nèi)大量生成的活性氧自由基，減輕腎組織的炎性損傷，從而減輕大鼠腎IRI，保護腎功能； 2、膽紅素的作用與其劑量有關(guān)，一定劑量的膽紅素可以減輕大鼠腎IRI，保護腎