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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分:小鼠皮膚無(wú)綠藻感染動(dòng)物模型的構(gòu)建
目的:構(gòu)建小鼠皮膚無(wú)綠藻感染模型。
方法:BALB/C小鼠分為4組,A組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1×109孢子數(shù)/ml中型無(wú)綠藻波多黎各變種懸液組;B組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1×106孢子數(shù)/ml懸液組;C組為健康小鼠,腹部皮下接種1×109孢子數(shù)/ml懸液組;D組為對(duì)照組,健康小鼠腹部皮下接種生理鹽水溶液,每個(gè)部位接種量均為200μl。接種后第7、14、28天時(shí)
2、觀察各組小鼠腹部皮損變化,并進(jìn)行腹部皮膚病理及真菌檢查。
結(jié)果:A、B、C組小鼠接種處均出現(xiàn)丘疹、膿腫,部分出現(xiàn)潰瘍、結(jié)痂,感染率均為100%。A、B、C三組小鼠的腹部皮損直徑,組內(nèi)相比,均在第7天時(shí)最大(P<0.05),分別為(6.75±1.09) mm、(5.88±1.17) mm和(5.96±0.99) mm;組間相比,在接種后第7、14天時(shí),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),在第28天時(shí),A組最大(P<0.05)為(4
3、.38±0.86) mm。實(shí)驗(yàn)組基本病理改變?yōu)閴乃馈⒛撃[、肉芽腫形成,HE染色和PAS染色均可見孢子,皮損直接鏡檢可見孢子,培養(yǎng)為無(wú)綠藻生長(zhǎng)。對(duì)照組未感染無(wú)綠藻。
結(jié)論:腹部皮下接種法可在免疫抑制和健康小鼠成功建立皮膚無(wú)綠藻病動(dòng)物感染模型。
第二部分:小鼠皮膚無(wú)綠藻感染差異表達(dá)基因的篩選
目的:利用基因表達(dá)譜芯片篩選小鼠感染無(wú)綠藻皮膚組織的差異表達(dá)基因,探討這些基因在皮膚無(wú)綠藻病中的作用,從而對(duì)皮膚無(wú)綠藻病
4、有更新的認(rèn)識(shí)。
方法:分別提取免疫抑制小鼠感染無(wú)綠藻的皮膚組織和對(duì)照組皮膚組織,抽提總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA同時(shí)進(jìn)行單色標(biāo)記,和小鼠全基因組表達(dá)譜芯片雜交,經(jīng)過(guò)芯片掃描和數(shù)據(jù)處理,分析出差異表達(dá)的基因,并對(duì)部分差異基因采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法進(jìn)行驗(yàn)證。
結(jié)果:感染無(wú)綠藻的小鼠皮膚組織中表達(dá)差異>2倍的基因共有9902個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的基因4974個(gè),表達(dá)下調(diào)的基因4928個(gè)。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),差異基因功能主要
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