葡萄糖對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：探討90mmol/L葡萄糖刺激大鼠腹膜間皮細(xì)胞后，VEGF及其受體核酸水平的時(shí)間變化曲線；探討不同濃度葡萄糖刺激下，大鼠腹膜間皮細(xì)胞VEGF及其受體表達(dá)的變化。 方法：分離、培養(yǎng)SD雄性大鼠腹膜問皮細(xì)胞，常規(guī)傳代及鑒定，第二代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。90mmol/L葡萄糖作用于細(xì)胞，RT—PCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)(0，0.5h，2h，8h，12h，24h，48h) VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2及sFlt-1 mRNA水

2、平的變化；分別用30mmol/L(低糖組)、60mmol/L(中糖組)、90mmol/L葡萄糖(高糖組)刺激大鼠腹膜間皮細(xì)胞，90mmol/L甘露醇作滲透壓對(duì)照(甘露醇組)，DMEM低糖培養(yǎng)基做對(duì)照(對(duì)照組)，刺激24小時(shí)，以RT—PCR檢測核酸水平的變化；ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF、sFlt-1蛋白質(zhì)表達(dá)水平，WesternBlot檢測VEGFR1、VEGFR2的蛋白質(zhì)變化。 結(jié)果：①培養(yǎng)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞融合后，具

3、有典型的鵝卵石狀或鋪路石樣上皮細(xì)胞形態(tài)。傳代后用抗大鼠Keratin、抗Vimentin抗體檢測相關(guān)抗原，結(jié)果顯示細(xì)胞抗大鼠Keratin、Vimentin表達(dá)陽性；②常規(guī)培養(yǎng)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞在核酸水平表達(dá)VEGF及受體VEGFR1、VEGFR2、sFlt-1。90mmol/L葡萄糖刺激后，VEGF和VEGFR2 mRNA表達(dá)水平下降，以12小時(shí)為最低；sFlt-1和VEGFR1 mRNA呈現(xiàn)先升高、降低后升高的趨勢，在24小時(shí)到達(dá)高

4、峰；③低糖組VEGFmRNA的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，而高糖組VEGFmRNA的表達(dá)顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，中糖組和甘露醇組VEGF mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比無差異(p均>0.05)；④低糖組、中糖組、高糖組VEGFR1mRNA表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(p均<0.01)，高糖組顯著高于中糖組及其他各組(p均<0.01)，葡萄糖刺激RPMCs上調(diào)VEGFR1mRNA表達(dá)，呈濃度依賴的趨勢；⑤中糖組、高糖組sFlt-1mRN

5、A表達(dá)均高于對(duì)照組(p均<0.05)，低糖組與對(duì)照組無差異(p>0.05)，葡萄糖刺激RPMCs上調(diào)sFlt-1mRNA表達(dá)，呈濃度依賴的趨勢：⑥中糖組、高糖組VEGFR2 mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組(p均<0.01)，葡萄糖下調(diào)RPMCs VEGFR2 mRNA表達(dá)，呈濃度依賴的趨勢；⑦ELISA結(jié)果顯示，低糖組VEGF的表達(dá)高于對(duì)照組(p<0.05)，而高糖組VEGF的表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05)；中糖組、高糖組sFlt-1表達(dá)均

6、高于對(duì)照組(p均<0.05)，低糖組與對(duì)照組無差異(p>0.05)；⑧Western Blot結(jié)果顯示，低糖組、中糖組、高糖組VEGFR1表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(p均<0.01)，高糖組顯著高于中糖組及其他各組(p均<0.01)，葡萄糖刺激RPMCs上調(diào)VEGFR1蛋白表達(dá)，呈濃度依賴的趨勢；中糖組、高糖組VEGFR2表達(dá)均低于對(duì)照組(p均<0.01)，高糖組表達(dá)低于低糖組和中糖組(p均<0.05)。葡萄糖下調(diào)RPMCs VEGFR2蛋白

7、表達(dá)，呈濃度依賴的趨勢。 結(jié)論：90mmol/L葡萄糖刺激后，VEGF和VEGFR2 mRNA表達(dá)下降；sFlt-1和VEGFR1 mRNA呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，24小時(shí)為表達(dá)高峰；葡萄糖上調(diào)VEGFR1和sFlt-1核酸和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，呈濃度依賴趨勢，同時(shí)下調(diào)VEGFR2的表達(dá)；低糖刺激可上調(diào)VEGF的表達(dá)，高糖刺激時(shí)VEGF表達(dá)下降；葡萄糖不僅可調(diào)節(jié)體外培養(yǎng)大鼠腹膜間皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)，同樣可以調(diào)節(jié)其受體VEGFR1