幾種分離自水稻產(chǎn)菌核真菌的生物學(xué)特性研究及鑒定.pdf

1、水稻紋枯病是水稻生產(chǎn)上最重要的三大病害之一，每年造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。紋枯病是由絲核菌屬真菌引起的水稻莖干和葉鞘病害的統(tǒng)稱，包括Rhizoctonia solaniKiihn、Rhizoctonia oryzae和Rhizoctonia Oryzae-sativae等，不同真菌在培養(yǎng)性狀、引起的病害在癥狀和危害部位上稍有差別。前期的研究發(fā)現(xiàn)分離自水稻紋枯病病斑的10個(gè)產(chǎn)菌核的真菌菌株培養(yǎng)性狀有明顯的差異，因此本文對(duì)它們進(jìn)行了系統(tǒng)的生物學(xué)性

2、狀和遺傳多樣性的比較研究，以期為源自水稻的不同絲核菌菌株的多樣性提供知識(shí)積累。 生物學(xué)性狀的研究主要包括菌落形態(tài)、核型、菌絲直徑和對(duì)水稻的致病性，不同pH值、溫度、碳源、氮源等培養(yǎng)條件對(duì)各菌株生長(zhǎng)的影響等。結(jié)果表明菌核在固體培養(yǎng)基上的分布方式主要有3種：隨機(jī)分布如rcol、wh-68、wh-79、B-10和wh-81，分布于培養(yǎng)皿中如wh-87、wh-81和wh-62，分布于培養(yǎng)皿邊緣如wh-1和wh-94。有性階段屬于瓜亡革菌

3、(Thanatephorus sp.)的菌株wh-1和wh-94的核型為多核，有性階段屬于角擔(dān)菌的wh-87、wh-81、wh-90和wh-62為雙核。Wh-68、wh-79和B-10為雙核，而Rcol為雜核，即絕大多數(shù)為雙核，部分細(xì)胞為多核甚至單核。多核類絲核菌wh-1和wh-94的菌絲直徑明顯大于wh-87、wh-81、wh-90和wh-62等雙核菌。不同菌株對(duì)水稻的致病性存在顯著差異，以wh-1和wh-94最強(qiáng)，而wh-68、wh

4、-79和B-10對(duì)供試的水稻品種基本無(wú)致病性。不同菌株在pH 6.0-7.0、25℃-30℃條件下，生長(zhǎng)速度最快。在含淀粉、脯氨酸、硫銨酸、甘氨酸或丙氨酸的的查彼克(czapek)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最快，在含乳糖和賴氨酸的查彼克培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最慢。在最適宜的碳源、氮源條件下，各菌株的生長(zhǎng)速度、菌核形成數(shù)目、菌核干重趨于一致。 wh-68、wh-79和B-10在PDA平板上產(chǎn)生如針頭大小的微菌核，與其他的菌株存在顯著差異，僅由

5、形態(tài)學(xué)很難確定其分類地位，所以對(duì)其進(jìn)行了分子鑒定。wh一68的18S rDNA與Rhizoctonia sp.AG-A同源性98％，與Ceratobasidium sp同源性99％。擴(kuò)增結(jié)果表明，ITS序列與Sclerotium hydrophilum 100％同源，所以確定其為稻球小菌核病菌(Sclerotium hydrophilumSacc)，也稱為喜水小核菌(球小菌核)，屬半知菌亞門真菌。 水稻絲核菌菌株的遺傳多樣性的研

6、究采用了RAPD技術(shù)。通過(guò)對(duì)模板DNA濃度、Taq酶、Mg<'2+>濃度、dNTP濃度、引物濃度、以及變性時(shí)間、循環(huán)次數(shù)、退火溫度等因素的探索，確定了優(yōu)化的RAPD反應(yīng)體系。利用優(yōu)化好的引物從s300-s399(上海sangon)共篩得到62條擴(kuò)增條帶清晰、譜帶豐富的引物。利用62條隨機(jī)引物對(duì)供試的7個(gè)菌株進(jìn)行擴(kuò)增，共獲得591個(gè)RAPD標(biāo)記。其中多態(tài)性標(biāo)記537個(gè)，占90.86％。聚類表明表明當(dāng)相似系數(shù)為0.55時(shí)可將供試菌株分為2個(gè)

7、類群，其中第一類群為為單一的一個(gè)類群，包括菌株wh-1和wh-94，第二類群包括三個(gè)亞類群，分別為第一亞類群(Rcol和wh-87)和第二亞類群(wh-62、wh-81和wh-90)，聚類結(jié)果與其生物學(xué)特性基本符合。菌株Rcol含有兩種類型的ITS，即Ceratobas.idium oryzse-sativae AG-Bb和Thanatephorus cucumeris AG-1-IA的ITS。 s393對(duì)wh-94和Rcol的擴(kuò)增也發(fā)