他莫昔芬對(duì)人肝癌細(xì)胞TGF-β1、Smad4和ER影響的研究.pdf

1、目的：在腫瘤細(xì)胞中，TGF-β1對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖起抑制作用，Smad4作為Smad通路中的核心因子，國(guó)內(nèi)外研究表明其與肝癌發(fā)生有一定關(guān)系。TGF-β1/Smad4通路的.信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常在肝癌發(fā)病中起一定的作用。雌二醇(E2)主要在肝臟代謝和滅活，可以誘導(dǎo)肝原癌基因活化。雌激素受體(ER)調(diào)控基因表達(dá)，與肝癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。近年來(lái)非}}{體類抗雌激素藥物他莫昔芬應(yīng)用于治療肝癌，但治療作用仍有爭(zhēng)議，作用機(jī)制未明。他莫昔芬對(duì)其他腫瘤細(xì)胞TG

2、F-β1、Smad4、ER的表達(dá)影響已經(jīng)有報(bào)道，但他莫昔芬作用后上述指標(biāo)在肝癌細(xì)胞表達(dá)的變化還沒(méi)有比較系統(tǒng)的文獻(xiàn)報(bào)道，本課題試圖通過(guò)研究人不同濃度及作用時(shí)間的他莫昔芬對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖及TGF-β1、Smad4、ER的表達(dá)的變化，探討TGF-β1、Smad4、ER在肝癌發(fā)生中的機(jī)制及他莫昔芬治療肝癌是否有效，并探討其機(jī)制，為應(yīng)用他莫昔芬治療肝癌提供實(shí)驗(yàn)及理淪基礎(chǔ)。 材料與方法:將人肝癌HepG2細(xì)胞株常規(guī)培養(yǎng)于RPMI

3、1640培養(yǎng)液中(內(nèi)含已用葡聚糖和活性炭去除了雌激素的10﹪小牛血清)，培養(yǎng)液中加入青霉素(濃度1 00U/ml)和鏈霉素(濃度100μg/ml)，在37℃、5﹪CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并進(jìn)行傳代。(1)觀察不同濃度及作用時(shí)間的他莫昔芬對(duì)人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：采用MTT測(cè)定光密度值(OD值)，計(jì)算抑制率；(2)人肝癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：倒置相差顯微鏡及HE染色觀察人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)狀況；(3)免疫組織化學(xué)染色(SP法)檢測(cè)不同濃度他莫昔芬分別培

4、養(yǎng)24 h、48 h和72 h后，人肝癌細(xì)胞TGF-β1、Smad4、ER表達(dá)的變化。 結(jié)論: 1、他莫昔芬抑制肝癌細(xì)胞的增殖，呈濃度一時(shí)間依賴。 2、他莫昔芬促進(jìn)肝癌細(xì)胞TGF-β1的表達(dá)，呈濃度一時(shí)間依賴。 3、他莫昔芬促進(jìn)肝癌細(xì)胞Smad4的表達(dá)，呈濃度一時(shí)間依賴。 4、他莫昔芬抑制肝癌細(xì)胞ER的表達(dá)，呈濃度一時(shí)間依賴。 5、他莫昔芬通過(guò)影響肝癌細(xì)胞TGF-β1、Smad4及ER的表