Roscovitine及其衍生物抗EV71病毒和抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的:探討細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑Roscovitine及其衍生物對EV71病毒的抑制作用并期望獲得比原藥活性更好、毒性更低的抗腫瘤藥物。
　　方法:1.在EV71病毒感染的7日齡ICR乳鼠模型上,通過存活率和平均日增重結(jié)果初步評價Roscovitine及其衍生物體內(nèi)抗EV71病毒結(jié)果。實驗結(jié)束,取肺、腦、腸、肌肉組織,分別通過 RT-PCR檢測組織中病毒 RNA含量;western印記技術檢測Roscovitine對EV71

2、病毒的VP1蛋白的抑制作用;病理切片HE染色檢測Roscovitine對小鼠病毒感染導致的組織損傷的保護作用。2.采用CCK8法檢測12種Roscovitine衍生對7種腫瘤細胞的增殖抑制作用;采用流式細胞術檢測衍生物對 HepG2、A549和MCF-7細胞周期和凋亡的影響;激酶活性實驗檢測衍生物對細胞周期蛋白激酶CDK的影響;體內(nèi)實驗檢測衍生物對人乳腺癌細胞MCF-7裸鼠皮下移植瘤生長的抑制作用。
　　結(jié)果:1. Roscovi

3、tine及其衍生物5、25、26、27、48、49、52、53可顯著提高EV71病毒感染小鼠的存活率,改善EV71病毒感染所致的小鼠體重增長緩慢;與病毒感染對照組相比,Roscovitine的4mg/kg/d處理組能顯著降低EV71病毒感染小鼠肺、腦、腸、肌肉組織中病毒 mRNA含量,降低 EV71病毒感染小鼠肺、腦和肌肉組織中病毒 VP1蛋白的表達,顯著改善病毒感染小鼠所致的肺、腦和肌肉組織的病理損傷。2. Roscovitine衍生

4、物4、26、27、52、53的治療指數(shù)TI值大于Roscovitine;與腫瘤細胞對照組相比,衍生物26、27、52、53顯著提高腫瘤細胞(HepG2、A549和MCF-7)的凋亡率,顯著升高S期和G2M期細胞比例,導致腫瘤細胞明顯停滯在S期或G2M期;與Roscovitine陽性對照組相比,衍生物26、27、52、53對腫瘤細胞(HepG2、A549和MCF-7)的凋亡和周期的影響不明顯;與Roscovitine相比,衍生物52、53

5、對CDK1/cyclin B激酶的活性抑制作用與其接近,衍生物26、27的活性抑制作用稍差;與模型對照組相比,衍生物26和52可顯著提高體內(nèi)對裸鼠人乳腺癌細胞MCF-7皮下移植瘤生長的抑制作用;與 Roscovitine對照組相比,衍生物26對對腫瘤生長的抑制作用與其相當,衍生物52對腫瘤生長的抑制作用比其稍差。
　　結(jié)論:Roscovitine及其衍生物5、25、26、27、48、49、52、53有抗EV71病毒的活性。Rosc