五倍子水提取物對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、牙髓疾病多繼發(fā)于齲病，是一個(gè)以細(xì)菌、細(xì)菌代謝產(chǎn)物及炎性因子等多因素參與的復(fù)雜過程。如何保護(hù)牙髓組織，促進(jìn)牙髓細(xì)胞增殖、分化，發(fā)揮防御修復(fù)潛能是活髓保存治療中研究的重點(diǎn)。五倍子中的主要有效成分為鞣酸，具有抗菌、抗自由基、收斂、止血、止痛、減少滲出等多種功效。已有研究證實(shí)它能抑制膠原分解，促進(jìn)牙本質(zhì)再礦化，抑制釉質(zhì)脫礦，用鞣酸間接蓋髓能促進(jìn)修復(fù)性牙本質(zhì)的形成。但是尚未有文獻(xiàn)報(bào)道其對(duì)直接蓋髓治療的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察五倍子水提取物對(duì)體外培養(yǎng)人

2、牙髓細(xì)胞基本生物學(xué)特性的影響，初步探討其作為直接蓋髓材料的可能性。 第一部分人牙髓細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的比較本實(shí)驗(yàn)分別采用組織塊法、酶消化法及組織塊酶消化法進(jìn)行人牙髓細(xì)胞原代培養(yǎng)。結(jié)果顯示：組織塊酶消化法中組織塊解離、貼附和細(xì)胞游出狀況均優(yōu)于單純組織塊法和單純酶消化法，成功率較高。提示：采用組織塊酶消化法可提高人牙髓細(xì)胞原代培養(yǎng)的成功率。 第二部分五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞周期的影響實(shí)驗(yàn)一五倍子水提取物對(duì)人牙髓

3、細(xì)胞增殖活性的影響本實(shí)驗(yàn)采用MTT 比色分析法，觀察2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 濃度的五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖活性的影響。 結(jié)果顯示： 五倍子水提取物濃度＜20μg/ml 時(shí)對(duì)人牙髓細(xì)胞的生長有促進(jìn)作用，并且該促進(jìn)作用具有時(shí)間依賴性，其中以10μg/ml 濃度作用最為明顯，而40μg/ml濃度可抑制細(xì)胞活性，抑制效應(yīng)見于72h 后，并隨時(shí)間的延長抑制作用加強(qiáng)。

4、 實(shí)驗(yàn)二五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞周期的影響本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)，觀察不同濃度的五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示：五倍子水提取物作用后，DNA合成前期(G1期)細(xì)胞比例明顯下降，而DNA合成期(S期)細(xì)胞比例及細(xì)胞增殖指數(shù)上升，其中以10μg/ml的五倍子水提取物作用最為明顯。 第三部分五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞堿性磷酸酶及礦化的影響實(shí)驗(yàn)一五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)2.

5、5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 濃度的五倍子水提取物作用于人牙髓細(xì)胞后對(duì)其堿性磷酸酶活性的影響。 結(jié)果顯示：2.5μg/ml、5μg/ml 濃度的五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞堿性磷酸酶的活性無影響，而濃度≥10μg/ml 時(shí)可抑制其活性，其中以40μg/ml 濃度作用最為明顯。 實(shí)驗(yàn)二五倍子水提取物對(duì)體外連續(xù)培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞礦化能力的的影響本實(shí)驗(yàn)采用鈣質(zhì)染色方法，鏡下觀察2.5μg

6、/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度的五倍子水提取物連續(xù)作用于體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞，對(duì)其礦化能力的影響。結(jié)果顯示：五倍子水提取物可以促進(jìn)體外連續(xù)培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞的礦化能力。 第四部分五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞I 型膠原合成的影響本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法，觀察了5μg/ml、10μg/ml 濃度的五倍子水提取物對(duì)人牙髓細(xì)胞I 型膠原合成的影響。結(jié)果顯示：正常人牙髓細(xì)胞中可見I 型膠原的表達(dá)，加入五倍子水提取物后