手霉素及其與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞3AO作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究手霉素及其與抗癌藥物順鉑(DDP)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞3AO的體外抑制作用，分析手霉素抑制3AO細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)其凋亡的可能機(jī)制，探討手霉素用于卵巢癌臨床治療的可行性。 方法： 1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞3AO，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)手霉素對(duì)該細(xì)胞增殖的影響。 2.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定手霉素對(duì)3AO細(xì)胞周期分布和凋亡的影響。 3.經(jīng)Giemsa染色光學(xué)顯微鏡觀察3AO細(xì)胞的形

2、態(tài)學(xué)改變，透射電鏡觀察3AO細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變。 4.提取手霉素作用前后3AO細(xì)胞的DNA，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析。 5.流式細(xì)胞術(shù)間接分析手霉素處理后3AO細(xì)胞Survivin、NF-κB(P65)蛋白的表達(dá)水平。 6.MTT比色法檢測(cè)手霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)3AO細(xì)胞增殖的抑制作用，采用金氏公式分析相互作用指數(shù)，評(píng)價(jià)兩藥聯(lián)合應(yīng)用后的作用，如相互作用指數(shù)>0.85表示相加作用，相互作用指數(shù)<0.85為拮抗作用。

3、 結(jié)果： 1.不同濃度的手霉素(5、10、20、40、80μmol/L)對(duì)3AO細(xì)胞的增殖可產(chǎn)生抑制作用，隨著手霉素濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)，而且隨著手霉素作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用也逐漸增強(qiáng)，有顯著性差異。即手霉素對(duì)3AO細(xì)胞增殖的抑制作用呈明顯的時(shí)間-劑量依賴關(guān)系。 2.0、5、10、20、40、80μmol/L的手霉素作用48h后的3AO細(xì)胞，隨著藥物濃度的增大，G0/G1期細(xì)胞逐漸減少，G2/M期細(xì)胞逐漸

4、增多，S期細(xì)胞變化不明顯，該作用呈劑量一效應(yīng)依賴關(guān)系。0、5、10、20、40、80μmol/L的手霉素處理3AO細(xì)胞48h后，細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡現(xiàn)象，且隨著手霉素濃度的增加，凋亡率逐漸增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡百分率分別為1.73％、2.39％、3.76％、14.37％、28.86％、36.32％。 3.光學(xué)顯微鏡下觀察未經(jīng)手霉素作用的對(duì)照組3AO細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或菱形，形態(tài)飽滿；而手霉素作用48h后的3AO細(xì)胞皺縮，破裂，呈不規(guī)則形，有的細(xì)

5、胞兩端出現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)的偽足，細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡，脫落細(xì)胞增多。Giemsa染色后光學(xué)顯微鏡下顯示，對(duì)照組3AO細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或菱形，形態(tài)飽滿，細(xì)胞核染色均勻，核仁清晰可見，未見凋亡細(xì)胞出現(xiàn)；而手霉素作用48h后的3AO細(xì)胞變圓，胞質(zhì)濃縮，核著色不均勻，出現(xiàn)核分裂現(xiàn)象，呈現(xiàn)凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。透射電鏡下觀察3AO細(xì)胞的形態(tài)顯示，手霉素作用48h后的3AO細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，如細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞核向外呈銳角突起，染色質(zhì)高度濃縮，電子

6、密度增高，邊集于核膜下或呈新月狀，有的出現(xiàn)核固縮。 4.提取手霉素作用48h后3AO細(xì)胞的DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，呈現(xiàn)典型梯狀電泳條帶，細(xì)胞DNA降解為有規(guī)律大小的片段，而對(duì)照組細(xì)胞則無降解現(xiàn)象發(fā)生。 5.0、10、20、40umol/L的手霉素處理48h后，3AO細(xì)胞的Survivin、NF-κB(P65)表達(dá)隨處理濃度增大而逐漸降低，表達(dá)量明顯下降，比較對(duì)照組和處理組的蛋白表達(dá)，差異均具有顯著性。 6.

7、手霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)3AO細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，10、20、40μmol/L的手霉素可加強(qiáng)順鉑對(duì)3AO細(xì)胞增殖的抑制作用。且隨著手霉素濃度的增大，其與順鉑的相加作用亦逐漸增強(qiáng)。金氏公式分析結(jié)果表明10、20、40μmol/L的手霉素聯(lián)合不同濃度的順鉑相互作用指數(shù)均>0.85。 結(jié)論： 1.手霉素具有抑制卵巢癌細(xì)胞3AO的增殖及誘導(dǎo)其凋亡的作用，為卵巢癌的臨床治療提供了理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2.手霉素具有抑制