水稻Xa7介導抗白葉枯病應答的信號途徑研究.pdf

1、水稻白葉枯病(Bacterail blight)是由稻黃單胞桿菌白葉枯致病變種(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)侵染所導致的一種細菌性病害，利用抗白葉枯病基因能有效地防治該病害。水稻抗白葉枯病基因Xa7是一個具有廣譜抗性的顯性基因，為了研究其在抗病應答中的信號途徑機理，利用基因芯片分析了水稻IRBB7（含Xa7）和IR24（感病對照）接種白葉枯病菌24h、48h后的基因表達情況，發(fā)現(xiàn)IRBB7中有883

2、個特異的差異表達基因，IR24中有3055個特異的差異表達基因。
　　基因的差異表達從接菌后24h開始，此時IRBB7中有207個特異地差異基因，我們根據(jù)基因功能注釋將其分為病程相關因子、轉錄因子、信號傳導類、基礎代謝類和未知功能類。通過半定量RT-PCR和Real time-PCR的進一步驗證，發(fā)現(xiàn)一個未知功能的基因(Os03g0853200)在Xa7抗病應答中被強烈誘導表達，但是卻不受Xa21抗病應答的誘導;而且，在沒有接菌的

3、水稻各組織中，該基因的表達非常低（除根外），接菌后在葉片的侵染處被迅速的誘導表達;這些結果表明這個基因可能是一個受Xa7特異性調(diào)控的基因。Os03g0853200基因編碼一個含有四次跨膜結構域的蛋白Tetraspanin，與動物的CD9/CD37/CD63抗原家族蛋白同源，在遺傳進化樹中與擬南芥的Tetraspanin3（簡稱TET3）處于同一分枝，因此將該基因命名為OsTET3。通過PCR擴增，從IRBB7和IR24中都克隆了OsTE

4、T3基因及其啟動子，產(chǎn)物測序后發(fā)現(xiàn)兩品種間沒有序列的差異性。
　　我們構建了OsTET3基因的過表達載體pCAMBLA1300-Pro35s∷OsTET3，經(jīng)農(nóng)感菌轉化到了水稻感病品種中花11愈傷組織中，并獲得了再生植株的小苗。同時，構建表達載體pCAMBLA1300-Pro35s∷ OsTET3(∶)eGFP，發(fā)現(xiàn)在本氏煙中OsTET3可能定位在質(zhì)膜上。這些研究結果為進一步分析OsTET3基因的功能及其在Xa7應答途徑中的作用，