蘋果花藥培養(yǎng)胚狀體形成的細(xì)胞學(xué)觀察.pdf

1、花藥培養(yǎng)是指采集小孢子細(xì)胞發(fā)育到了一定階段的花藥，使其能在人工合成的培養(yǎng)基中存活生長(zhǎng)，并且改變花粉發(fā)育途徑，使其不形成配子體，而像全能細(xì)胞一樣分裂、分化，由單個(gè)的小孢子細(xì)胞發(fā)育并且長(zhǎng)成完整植株的技術(shù)?；ㄋ幣囵B(yǎng)是人工單倍體育種的重要手段，因其可操作應(yīng)強(qiáng)，誘導(dǎo)率高等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于各植物育種方面的研究。蘋果單倍體育種的主要手段也是花藥培養(yǎng)，蘋果花藥培養(yǎng)首先得到胚狀體，再誘導(dǎo)胚狀體生成幼苗，幼苗經(jīng)過培養(yǎng)長(zhǎng)成單倍體的植株。而胚狀體的獲得作為完整

2、的技術(shù)鏈中的第一步，也是最關(guān)鍵的一步。本研究的主要目的是從細(xì)胞水平探明蘋果花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)形成胚狀體的細(xì)胞學(xué)發(fā)育過程。首先對(duì)丹霞、嘎啦花藥進(jìn)行培養(yǎng)，并且采集培養(yǎng)過程中不同培養(yǎng)天數(shù)的花藥，制作石蠟切片進(jìn)行觀察，對(duì)觀察到的不同發(fā)育階段的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和數(shù)據(jù)分析，最后對(duì)花藥的胚狀體和愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。得到的結(jié)果如下:
　　1、蘋果花藥制片技術(shù)優(yōu)化:在傳統(tǒng)的制作石蠟切片的基礎(chǔ)上對(duì)脫水梯度、時(shí)間和染色時(shí)間進(jìn)行了改良，使其適用于蘋果花

3、藥的細(xì)胞學(xué)觀察。通過實(shí)驗(yàn)獲得一套適合蘋果花藥的完整石蠟切片制片技術(shù)流程，即石蠟切片的脫水環(huán)節(jié)改為50％、60％、70％、85％、95％、100％的梯度乙醇，以保證脫水后的花藥不會(huì)皺縮變形，保持飽滿狀態(tài);染色采用埃里希氏蘇木精染液染色15min，以保證切片染色良好。
　　2、蘋果小孢子細(xì)胞發(fā)育過程觀察:通過對(duì)石蠟切片進(jìn)行細(xì)胞學(xué)觀察，并且與合子胚發(fā)育過程相對(duì)比，了解到蘋果花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育的特點(diǎn)，即花粉胚性細(xì)胞發(fā)育時(shí)，其基細(xì)胞與頂細(xì)胞

4、發(fā)育無(wú)先后之分。
　　3、通過鏡檢，找到了蘋果花粉細(xì)胞從單個(gè)細(xì)胞，到多細(xì)胞團(tuán)，再到球形胚，心形胚的細(xì)胞發(fā)育過程，且兩品種細(xì)胞發(fā)育過程相同。
　　4、通過比較不同品種胚發(fā)生過程中細(xì)胞的狀態(tài)，觀察嘎啦與丹霞的花粉細(xì)胞發(fā)育狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)嘎啦在花藥培養(yǎng)過程中分裂的細(xì)胞所占比例較少，而愈傷組織細(xì)胞很多，丹霞在花藥培養(yǎng)過程中分裂的細(xì)胞所占比例較多，而愈傷組織細(xì)胞較少，并且在5d-60d的花藥培養(yǎng)過程中，嘎啦的愈傷組織細(xì)胞分布與丹霞的分裂細(xì)胞

5、分布相似，都是在15d-17d之間細(xì)胞分裂分化活躍。但因兩個(gè)品種基因型不同，樹體本身營(yíng)養(yǎng)條件不同，故兩者的細(xì)胞發(fā)育差異性需后期深入研究。
　　5、通過對(duì)比不同培養(yǎng)天數(shù)下細(xì)胞狀態(tài)，將胚狀體發(fā)生過程中的所有細(xì)胞狀態(tài)，即正常細(xì)胞，分裂細(xì)胞，愈傷組織細(xì)胞以及死亡的細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):正常細(xì)胞在整個(gè)胚發(fā)生過程中所占比例平均，沒有明顯變化;培養(yǎng)5d-17d是細(xì)胞分裂的主要時(shí)期，15d-17d是細(xì)胞分裂最旺盛的時(shí)間段;丹霞品種愈