ERK蛋白磷酸化在體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧-復(fù)氧后活化及增殖中的作用.pdf

1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文ERK蛋白磷酸化在體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧復(fù)氧后活化及增殖中的作用姓名：竇長(zhǎng)新申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：董瑞國(guó)201204徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文(分別標(biāo)記為H8，H8R8，HSRl2，H8R24)的細(xì)胞，采用AnnexinV／碘化丙啶(PropidiumIodide，PI)雙染法應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率。采用SPSS160統(tǒng)汁軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果1GFAP鑒定結(jié)果：GFAPDAPI(4’，6

2、diamidino2phenylindole)免疫熒光雙標(biāo)顯示雙陽(yáng)性細(xì)胞的胞質(zhì)為綠色，細(xì)胞核為藍(lán)色，結(jié)果顯示98％以上為陽(yáng)性細(xì)胞，符合實(shí)驗(yàn)要求。2Westernblot半定量檢測(cè)：非缺氧組ERK蛋白磷酸化水平較低，缺氧組細(xì)胞缺氧／復(fù)氧后各時(shí)間點(diǎn)ERK蛋白磷酸化水平較非缺氧組升高(尸005)。阻滯劑組ERK蛋白磷酸化水平較無(wú)阻滯劑組下降。3MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力：缺氧組細(xì)胞隨時(shí)間延長(zhǎng)，AC活力較非缺氧組降低的趨勢(shì)更加明顯，復(fù)氧12h后差異有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)；阻滯劑組較無(wú)阻滯劑組細(xì)胞活力下降，復(fù)氧12h后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。4Brdu免疫熒光檢測(cè)AC增殖：非缺氧組細(xì)胞未見(jiàn)染色，缺氧組細(xì)胞缺氧期未見(jiàn)染色，復(fù)氧后隨時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞核染色逐漸增多(P005)。阻滯劑組細(xì)胞復(fù)氧后各時(shí)間點(diǎn)較無(wú)阻滯劑組細(xì)胞核染色減少，隨時(shí)間延長(zhǎng)，組間差異逐漸顯著，復(fù)氧48h時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。5ELISA法檢測(cè)TNFcc分泌：非缺氧組給予阻滯劑后較非缺氧無(wú)阻滯劑組比較差異不明顯

4、，缺氧組各時(shí)間點(diǎn)TNF0【的分泌較非缺氧組升高(PO05)，隨時(shí)間延長(zhǎng)趨勢(shì)逐漸明顯，阻滯劑組與非阻滯劑組比較TNFQ的分泌增加，隨時(shí)間延長(zhǎng)，差異更加顯著，在復(fù)氧24h后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)。6AnnexinV／PI雙染測(cè)定細(xì)胞凋亡：非缺氧組細(xì)胞給予阻滯劑后凋亡率較無(wú)阻滯劑時(shí)無(wú)差異，缺氧組各時(shí)間點(diǎn)與非缺氧組比較細(xì)胞凋亡率升高(JPO05)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，升高趨勢(shì)逐漸明顯，給予U0126后細(xì)胞的凋亡率升高更加顯著，在復(fù)氧24h時(shí)差異有