化濁解毒法組方調(diào)節(jié)MCP-1和Il-13和抗DMN致實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察以化濁解毒法組方對(duì)二甲基亞硝胺(DMN)致大鼠肝纖維化模型中肝組織Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型膠原蛋白(ColⅢ)的表達(dá)，以及血清中單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)含量的影響，評(píng)價(jià)化濁解毒方對(duì)大鼠肝纖維化的調(diào)節(jié)作用，探討其可能的作用機(jī)制，為化濁解毒法治療肝纖維化提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從方證相關(guān)的角度，為以濁毒論治肝纖維化提供分子水平的依據(jù)。
　　 方法:清潔級(jí)SD雄性大鼠70只，體

2、重200g±20g，于購(gòu)入并自適應(yīng)喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為四組，即正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，復(fù)方鱉甲軟肝片組，化濁解毒法組方高、中、低三個(gè)劑量組。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均按每次10mg/kg于同一時(shí)刻給予腹腔注射1％DMN，以制備大鼠肝纖維化模型。第1周連續(xù)注射3天;第2到6周每周連續(xù)注射2天，共13次。在造模的第2、4周末分別處死模型組大鼠各4只，觀察肝組織病理切片纖維化程度。至第4周末，大鼠中度肝纖維化模型建立。于造模第5周開(kāi)始，正常

3、對(duì)照組、模型對(duì)照組大鼠灌胃給予10ml/kg·d生理鹽水，其余各組大鼠按相應(yīng)劑量進(jìn)行等體積灌胃給藥，連續(xù)給藥至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。至第8周末，處死全部受試大鼠，取大鼠新鮮肝臟組織，運(yùn)用RT-PCR法檢測(cè)肝臟組織中ColⅠ、ColⅢ的含量，運(yùn)用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中MCP-1、IL-13的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組大鼠的一般情況:正常對(duì)照組大鼠無(wú)死亡情況，模型對(duì)照組大鼠死亡3只，化濁解毒方高劑量組死亡2只。正常對(duì)照組大

4、鼠進(jìn)食良好，毛色光澤，精神飽滿，體重有所增加，反應(yīng)靈敏好動(dòng)，大便呈顆粒狀。其余各組大鼠均有不同程度的進(jìn)食減少，皮毛稀疏，精神萎靡不振，體重減輕，便溏等。給予化濁解毒方和復(fù)方鱉甲軟肝片以后，大鼠的一般情況均得到不同程度的改善。
　　 2、化濁解毒方對(duì)大鼠肝組織中ColⅠ水平的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組ColⅠ表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型對(duì)照組相比，化濁解毒方中劑量組ColⅠ表達(dá)明顯降

5、低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);化濁解毒方低劑量、復(fù)方鱉甲軟肝片組ColⅠ表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);化濁解毒方高劑量組ColⅠ表達(dá)降低不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、化濁解毒方對(duì)大鼠肝組織中ColⅢ水平的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組ColⅢ表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型對(duì)照組相比，化濁解毒方中劑量組ColⅢ表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

6、＜0.01）;化濁解毒方低劑量、復(fù)方鱉甲軟肝片組ColⅢ表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);化濁解毒高劑量方組ColⅢ表達(dá)降低不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、化濁解毒方對(duì)大鼠血清中MCP-1水平的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組MCP-1表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;與模型對(duì)照組相比，除化濁解毒方高劑量組外（P＞0.05），各治療組MCP-1表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);復(fù)方鱉甲軟肝片MCP-1表達(dá)較化濁解毒方高、低劑量組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。
　　 5、化濁解毒方對(duì)大鼠血清中IL-13水平的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組IL-13表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;與模型對(duì)照組相比，各給藥組大鼠血清IL-13表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);復(fù)方鱉甲軟肝片IL-13表達(dá)較化濁解毒方高劑量組顯

8、著降低（P＜0.0.1）;化濁解毒方中劑量組IL-13表達(dá)與高、低劑量相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、化濁解毒方能夠改善肝纖維化大鼠的一般情況。
　　 2、化濁解毒方可以不同程度的改善肝纖維化大鼠肝組織ColⅠ、ColⅢ的情況，以中劑量效果最為明顯。
　　 3、化濁解毒方可減少血清中細(xì)胞因子MCP-1及IL-13的表達(dá)，發(fā)揮抗肝纖維化的作用。