莪術(shù)醇誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡與ROS關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡(Apoptosis)是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，由基因調(diào)控的主動(dòng)的死亡過(guò)程。從細(xì)胞凋亡這一新視角來(lái)看中醫(yī)藥抗腫瘤作用，對(duì)于從分子水平揭示中藥的作用機(jī)制，篩選新的抗癌中藥具有十分重要的意義。 莪術(shù)是姜科姜黃屬多年生草本植物的根莖，中醫(yī)常將莪術(shù)與三棱、丹參、白術(shù)等配伍應(yīng)用治療各種腫瘤。莪術(shù)醇(Curcumol)，又名姜黃環(huán)奧醇，是從莪術(shù)揮發(fā)油中提取的有效單體成份，莪術(shù)醇抗菌、抗病毒作用在臨床上已廣泛應(yīng)

2、用，但其抗腫瘤作用國(guó)內(nèi)外研究尚少。本課題對(duì)莪術(shù)醇抗腫瘤作用及其機(jī)制進(jìn)行研究，力圖使莪術(shù)醇成為一種抗腫瘤新藥。 1.目的： 通過(guò)檢測(cè)莪術(shù)醇對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的影響、觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化、檢測(cè)細(xì)胞凋亡率以及細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平的變化。探討莪術(shù)醇誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡的機(jī)制，進(jìn)一步闡明莪術(shù)醇抗腫瘤的作用機(jī)理，為莪術(shù)醇抗腫瘤作用的臨床應(yīng)用提

3、供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2.方法： 將莪術(shù)醇溶于無(wú)水乙醇溶液，設(shè)實(shí)驗(yàn)A、B、C、D組，其莪術(shù)醇濃度分別為12.5、25、50、100μg/mL。對(duì)照組用1％的無(wú)水乙醇培養(yǎng)基。 采用四氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)不同濃度的莪術(shù)醇對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的影響；采用吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)雙熒光染色及熒光顯微鏡觀察經(jīng)過(guò)不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；通過(guò)依賴性磷脂結(jié)合蛋白(FIT

4、C-Annexin V)與碘化丙啶(PI)雙染法，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率；采用流式細(xì)胞術(shù)，通過(guò)間接熒光標(biāo)記法測(cè)定經(jīng)過(guò)不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的變化。 3.結(jié)果： 3.1 MTT法檢測(cè)不同濃度莪術(shù)醇處理人胃癌BGC-823細(xì)胞24、48、72h，均可抑制細(xì)胞增殖，且呈濃度、時(shí)間依賴性。12.5、25、50、100μg/mL莪術(shù)醇

5、作用24、48、72h，實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞增殖的抑制率與對(duì)照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2熒光顯微鏡觀察到EB為紅色，只能染色死亡細(xì)胞核。正?；罴?xì)胞胞膜完整，EB不能滲透，細(xì)胞核不能染色。AO為綠色，可用于染色活細(xì)胞。對(duì)照組可見(jiàn)整個(gè)細(xì)胞為綠色，說(shuō)明為正?；罴?xì)胞，經(jīng)莪術(shù)醇作用后，整個(gè)細(xì)胞背景為綠色，細(xì)胞膜較完整，細(xì)胞核中紅色和綠色重合時(shí)為橘紅色，細(xì)胞核呈固縮狀或圓珠狀，即為凋亡時(shí)的形態(tài)學(xué)變化(凋亡小體)。 3.

6、3根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)圖譜，F(xiàn)ITC+/PI-為凋亡細(xì)胞。人胃癌BGC-823細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同濃度的莪術(shù)醇作用后，凋亡細(xì)胞比例明顯升高，且呈濃度、時(shí)間依賴性。12.5、25、50、100μg/mL莪術(shù)醇作用24、48h，實(shí)驗(yàn)組胃癌細(xì)胞的凋亡率與對(duì)照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。 3.4利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)不同濃度莪術(shù)醇作用人胃癌BGC-823細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平與莪術(shù)醇呈濃度、時(shí)間依賴性升高。12.