核桃遺傳多樣性分析及核心種質(zhì)的構(gòu)建.pdf

1、核桃是原產(chǎn)于我國(guó)的重要干果樹(shù)種，其種質(zhì)資源十分豐富，存在許多特異種質(zhì)資源，但是對(duì)我國(guó)核桃屬植物遺傳多樣性的研究尚少。本試驗(yàn)利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)普通核桃131份材料的遺傳多樣性進(jìn)行了分析，構(gòu)建了核桃的核心種質(zhì)，并對(duì)核桃種間的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下： 1.確定了適于A(yíng)FLP分析的核桃基因組DNA提取方法為改良CTAB法，其提取液成份為：100mmol/LTris-HCl，pH8.0；20mmol/LEDTA；1.4m

2、ol/LNaCl；2﹪CTAB；2﹪PVP40；100mmol/LB-巰基乙醇和10mmol/LNa2S2O5。粗提后的DNA經(jīng)RNase液、苯酚-氯仿各抽提一次，氯仿-異戊醇抽提兩次，得到了濃度大，基本無(wú)降解，蛋白質(zhì)和RNA去除徹底，純度高、質(zhì)量好的核桃基因組DNA。 2.從126對(duì)引物組合中篩選出20對(duì)多態(tài)性高、條帶清晰、分布均勻的引物組合用于普通核桃品種AFLP分析，共擴(kuò)增出1643條電泳譜帶，平均每對(duì)引物產(chǎn)生約82條譜帶

3、，其中1512條為多態(tài)性帶，多態(tài)性比率為92.03﹪；其余131條譜帶為所有材料共有，占7.97﹪。 3.從20對(duì)譜帶清晰、多態(tài)性高的引物組合隨機(jī)選出8對(duì)引物對(duì)核桃種間31個(gè)材料進(jìn)行AFLP分析，共擴(kuò)出833條電泳譜帶，平均每對(duì)引物產(chǎn)生約102條AFLP帶，其中14個(gè)條帶為所有材料共有，占1.68﹪；其余819條均為多態(tài)性帶，多態(tài)性檢出率為98.32﹪。在核桃不同種之間AFLP標(biāo)記的多態(tài)性檢出率存在較大差異 4.UPGM

4、A法對(duì)20對(duì)引物擴(kuò)增的1643條譜帶進(jìn)行聚類(lèi)分析，建立了131份供試材料的AFLP樹(shù)狀圖，結(jié)合各樣品間的遺傳相似系數(shù)對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行了分析，揭示了供試材料間遺傳背景的相似性及復(fù)雜性，為核桃的品種鑒定和產(chǎn)權(quán)保護(hù)，提供了理論依據(jù)。 5.采用逐步聚類(lèi)分組法，以多態(tài)性帶為主要指標(biāo)，結(jié)合形態(tài)分類(lèi)學(xué)指標(biāo)及地理來(lái)源，構(gòu)建了供試品種的核心種質(zhì)。 6.通過(guò)對(duì)核桃種間材料的遺傳多樣性進(jìn)行分析，可將核桃屬8個(gè)種分為4個(gè)組，黑核桃組，野核桃、