香附四物湯的活性物質(zhì)基礎(chǔ)及其木香的化學(xué)成分研究.pdf

1、本文在第一章綜述了氣滯血瘀證的發(fā)病機理和原發(fā)性痛經(jīng)的研究進展，探討了香附四物湯治療氣滯血瘀證痛經(jīng)的中醫(yī)理論指導(dǎo)和臨床應(yīng)用，還總結(jié)了從1965年到現(xiàn)在人們對木香的化學(xué)研究概況。
　　 在第二章的實驗部分，對香附四物湯的湯劑用D101大孔吸附樹脂和纖維膜進行分離，制得19個部位(XF-1～XF-19)，并對它們進行了活性評價。
　　 1.抑制小鼠離體子宮平滑肌收縮運動的活性評價評價了香附四物湯各分離部位抑制小鼠離體子宮平滑肌

2、收縮運動的活性。實驗前皮下注射苯甲酸雌二醇造成小鼠人工動情期以提高子宮對藥物的敏感性。取卵巢及子宮分叉處之間的中段子宮，將肌條安置在恒溫平滑肌槽中，每個肌槽中分別盛有Locke's液。待肌條的自發(fā)活動平穩(wěn)后加入待試樣品，觀察其對小鼠離體子宮平滑肌條收縮活動的影響。記錄給藥前后子宮平滑肌條的收縮波頻率、平均振幅和肌張力，并計算樣品對這三個指標(biāo)的抑制率。本文用3個評價指標(biāo)分析香附四物湯各部位抑制離體子宮收縮的實驗結(jié)果表明：XF-2、XF-5

3、和XF-13有顯著抑制離體子宮收縮的活性。其中XF-19在小劑量時，表現(xiàn)出對離體子宮收縮頻率顯著的抑制作用，而對離體子宮收縮幅度和肌張力則表現(xiàn)出顯著的興奮活性，XF-19在大劑量時對子宮收縮頻率的抑制活性降低，而對離體子宮收縮幅度和肌張力則表現(xiàn)出抑制的趨勢，這提示著XF-19可能存在著雙向調(diào)節(jié)作用。
　　 2.抑制血小板聚集的活性評價評價了香附四物湯各部位對血小板聚集的抑制活性，以生理鹽水作為空白對照，以川芎嗪為陽性對照，觀察香

4、附四物湯各部位對ADP誘導(dǎo)家兔血小板聚集的抑制作用。實驗結(jié)果表明，DMSO溶劑對實驗未見明顯影響，香附四物湯經(jīng)D101大孔吸附樹脂分離得到的10～30％乙醇洗脫部位(即XF-8～XF-10)均顯示出對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有顯著的抑制作用(P<0.05)，其中XF-8的P<0.005，表現(xiàn)出顯著的抑制血小板聚集活性，而其他部位在100μg/ml的劑量下未見明顯的抑制活性(P>0。05)。
　　 3.XF-8一XF-10部位的HP

5、LC分析用HPLC分析了XF-8～XF-10部位，并且將其與單味對照藥材作比較，實驗結(jié)果表明，XF-9中檢測到的主要成分在XF-8中也存在，XF-10中的化學(xué)成分與XF-8和XF-9相比有較大差異，XF-8中的主要成分來源于延胡索、川芎和木香，XF-9中的主要成分來源于延胡索、木香。所以香附四物湯中抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的活性成分來源于延胡索，川芎，木香中極性較大的化學(xué)成分。
　　 4.生物堿類成分的HPLC-ESI-QTO

6、F/MS分析采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HPLC-ESI-QTOF/MS)分析鑒定了XF-8～16中生物堿類化學(xué)成分。根據(jù)所測得的各個組分分子離子峰的m/z值，通過查閱文獻，并與延胡索單味藥材比較，巴馬丁，非洲防己堿在XF-12～16部位均出現(xiàn)，四氫非洲防己堿，脫氫紫堇堿在XF-12～15部位出現(xiàn)，原托品堿在XF-12～14部位出現(xiàn)，延胡索乙素、紫堇堿和小檗堿只在XF-12部位出現(xiàn)，在XF-8～11部位均未出現(xiàn)此類生物堿成分。在XF-12部位出現(xiàn)

7、的生物堿成分最多，從XF-12到XF-16部位，生物堿成分逐漸減少，到XF-16部位時最少。抑制離體子宮收縮實驗的研究結(jié)果表明，XF-12和13有顯著抑制離體子宮收縮的活性，這就提示香附四物湯中抑制離體子宮收縮的活性物質(zhì)來源于延胡索中的小蘗堿類生物堿。
　　 5.木香揮發(fā)油的GC-MS分析采用水蒸氣蒸餾法提取木香揮發(fā)油，采用毛細管氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)對揮發(fā)油中化學(xué)成分進行分析鑒定，鑒定出了木香揮發(fā)油中59個分，其

8、主要成分為去氫木香內(nèi)酯、木香烴內(nèi)酯、雪松烯醇、α-欖香烯、環(huán)辛二烯、桉葉(油)醇、α-芹子烯、丁子香烯、長松葉烯、7-甲基-3，4辛二烯等，占揮發(fā)油總量的72.91％。
　　 6.木香化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定利用硅膠柱色譜柱層析和重結(jié)晶等方法從云木香根的60％乙醇提取物中分離得到9個化合物，通過1H-NMR、13C-NMR、2DNMR和MS鑒定其結(jié)構(gòu)，分別新木香烯酸(Neolappaic acid)，Santamarine、β-