不同吸氧方式在新生小鼠視網(wǎng)膜病變發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分不同日齡新生小鼠視網(wǎng)膜血管對氧療的敏感性 目的：給不同日齡新生小鼠吸氧，觀察日齡對氧療的敏感性，研究視網(wǎng)膜血管的發(fā)育程度與新生血管形成的關系。 方法：選擇4、7、9、11日齡C57BL／6J新生小鼠各48只，分別分為高氧組和空氣組，高氧組給予吸入75％氧氣5天后返回到空氣中，空氣組置于同實驗條件下的空氣中。通過視網(wǎng)膜鋪片和視網(wǎng)膜切片定性和定量的研究，觀察視網(wǎng)膜血管的變化。視網(wǎng)膜鋪片經(jīng)ADP酶染色，觀察視網(wǎng)膜血管形

2、態(tài)的改變；視網(wǎng)膜切片經(jīng)常規(guī)HE染色，計數(shù)突破視網(wǎng)膜內界膜的新生血管內皮細胞核數(shù)目，定量觀察視網(wǎng)膜血管的增生情況。 結果：與各空氣組相比，4、7、9日齡高氧組小鼠吸高氧5天后(出氧箱當天)，視網(wǎng)膜鋪片顯示血管明顯收縮、阻塞，視網(wǎng)膜中央大片無灌注區(qū)：返回空氣第2天，新生血管開始形成；第5天，新生血管形成達到高峰。而11日齡高氧組小鼠在返回空氣第5天未見新生血管形成。4、7、9、11日齡高氧組小鼠出氧箱第5天突破視網(wǎng)膜內界膜的血管內皮

3、細胞核數(shù)目分別為25．0±3．7、47．7±5．0、18．7±2．0、2．6±1.4個，4、7、9、11日齡空氣組分別為0．7±1．1、1．2±1．2、0．8±1．O、1．6±1．0個，4、7、9日齡高氧組細胞核數(shù)目明顯增多，與相應的空氣組比較，差異有顯著意義(P<0．01)；¨日齡高氧組細胞核數(shù)無明顯增多，與11日齡空氣組比較，差異無顯著意義(P=0．07)。7日齡高氧組細胞核數(shù)目最多，與4、9、11日齡高氧組比較差異有顯著意義(P<

4、0．01)。 結論：4、7、9日齡C57BL／6J新生小鼠視網(wǎng)膜血管對氧療敏感，吸75％氧5天后發(fā)生了類似人類ROP的視網(wǎng)膜病變，其中7日齡新生小鼠病變最嚴重，是制備ROP的最理想動物模型。11日齡新生小鼠吸75％氧5天后未發(fā)生視網(wǎng)膜病變。視網(wǎng)膜血管的發(fā)育程度與新生血管形成有關，視網(wǎng)膜血管發(fā)育越不成熟越易發(fā)生視網(wǎng)膜病變，而發(fā)育成熟的視網(wǎng)膜則不會發(fā)生視網(wǎng)膜病變。 第二部分不同吸氧方式對新生小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)育的影響及在視網(wǎng)膜

5、病變發(fā)病中的作用 目的：研究不同吸氧方式對新生小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)育的影響及在視網(wǎng)膜病變發(fā)病中的作用，為早產(chǎn)兒臨床合理用氧提供實驗依據(jù)。 方法：選擇7日齡C57BL／6J新生小鼠720只，隨機分為6組，每組120只。具體分組如下：緩升驟停組：Fi02由30％逐漸升高至75％后突然中斷吸氧；暫高緩停組：吸75％氧1天，然后逐漸降低Fi02直至停氧；高氧驟停組：吸75％高氧5天后驟然停氧；高氧緩停組：吸75％高氧5天后逐漸降低F

6、i02直至停氧；高氧波動組：Fi02波動較大，隔天吸75％高氧和空氣共6天；對照組：置于同實驗條件下的空氣中。觀察各組視網(wǎng)膜血管改變：視網(wǎng)膜鋪片經(jīng)ADP酶染色，觀察視網(wǎng)膜血管形態(tài)的動態(tài)改變；視網(wǎng)膜切片經(jīng)常規(guī)HE染色，計數(shù)每只小鼠每張切片上突破視網(wǎng)膜內界膜的新生血管內皮細胞核數(shù)目，定量觀察視網(wǎng)膜血管的增生情況。各組P7一P21隔天剝離視網(wǎng)膜，采用實時熒光定量PCR法檢測各組小鼠視網(wǎng)膜VEGF、PEDF和IGF．1mRNA表達水平，各組P7

7、一P21隔天取小鼠摘取眼球，制備切片，采用免疫組化法檢測各組小鼠視網(wǎng)膜VEGF、PEDF蛋白結論：1．不同吸氧方式對視網(wǎng)膜血管發(fā)育產(chǎn)生不同的影響，吸入氧濃度波動較大、吸入高濃度氧后突然停氧可嚴重影響新生小鼠視網(wǎng)膜血管的發(fā)育，形成新生血管，產(chǎn)生類似早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病的病變。因此臨床上應盡早穩(wěn)定早產(chǎn)兒的生命體征，減少氧療，嚴密監(jiān)測用氧情況，采取逐漸降低氧濃度的吸氧方式，并盡量避免氧濃度波動過大。2．VEGF、PEDF和IGF．1共同參與新生血管

8、形成的調節(jié)，VEGF促進新生血管形成，而PEDF抑制新生血管形成。高氧下調VEGF表達，上調PEDF表達，使VEGF／PEDF比值下降；而低氧則正好相反，使VEGF／PEDF比值上升，促進新生血管形成。IGF—l對維持正常視網(wǎng)膜血管發(fā)育起重要作用，并與VEGF共同促進新生血管形成。 第三部分補氧對新生小鼠視網(wǎng)膜病變新生血管的影響 目的：對已發(fā)生視網(wǎng)膜病變的新生小鼠繼續(xù)使用不同濃度的氧氣，觀察視網(wǎng)膜血管的變化，為臨床上已發(fā)

9、生ROP病變患兒的氧療提供實驗依據(jù)。 方法：7日齡C57BL／6J新生小鼠210只，根據(jù)不同的補氧方案將新生小鼠分為8組。非補氧組：小鼠吸75％高氧5d，出氧箱后返回到空氣中；30％、50％、75％補氧組：小鼠吸75％高氧5d后，再分別吸入30％、50％、75％02各5天；間斷30％、50％、75％補氧組：小鼠吸75％高氧5d后停氧2d，再分別吸入30％、50％、75％O2各5天；對照組置于同實驗條件下的空氣中。觀察各組視網(wǎng)膜血

10、管改變：視網(wǎng)膜鋪片經(jīng)ADP酶染色，觀察視網(wǎng)膜血管形態(tài)的動態(tài)改變；視網(wǎng)膜切片經(jīng)常規(guī)HE染色，計數(shù)每只小鼠每張切片上突破視網(wǎng)膜內界膜的新生血管內皮細胞核數(shù)目，定量觀察視網(wǎng)膜血管的增生情況。 結果：1．視網(wǎng)膜鋪片：對照組，P12見少量無灌注區(qū)，周邊血管結構清晰，P14無灌注區(qū)消失，血管形態(tài)基本正常，P17起血管形態(tài)全部正常。非補氧組，P12視網(wǎng)膜中央部有大片無灌注區(qū)，血管收縮、閉塞，P14新生血管開始形成，P17大量新生血管形成。30

11、％補氧組，P17見大片無灌注區(qū)，開始出現(xiàn)新生血管，P19、P22有大量新生血管形成。50％、75％補氧組，P17見少量無灌注區(qū)，血管分支少，走行僵直，P19無灌注區(qū)消失，大血管管徑、分支、走行均基本正常，僅見深層血管有阻塞現(xiàn)象，P22血管發(fā)育基本成熟，可見兩層血管網(wǎng)結構。間斷30％補氧組，P19少量新生血管，P21、P24血管網(wǎng)結構紊亂，大量新生血管形成。間斷50％、75％補氧組，P19見少量無灌注區(qū)，血管分支、管徑、走行基本正常，深層

12、血管有阻塞現(xiàn)象，P21無灌注區(qū)消失，血管發(fā)育基本成熟，P24血管發(fā)育完全成熟，兩層血管網(wǎng)結構清晰。2．視網(wǎng)膜切片：非補氧組，30％、50％、75％補氧組，間斷30％、50％、75％補氧組小鼠突破視網(wǎng)膜內界膜的新生血管內皮細胞核分別為47．7±5．2、24．9±4．0、2．6±1．5、3．8±2．2、31．1±4．8、2．0±1．5、8．9±3．1個，對照組為1．2±1．1個。非補氧組、30％、間斷30％補氧組細胞核數(shù)目明顯增多，與對照組

13、比較差異有顯著意義(P<0．05)；50％、75％補氧組、間斷50％、75％補氧組細胞核數(shù)目無明顯增多，與對照組比較差異無顯著意義(P值分別為0．688，0．446，0．809，0．24)。各實驗組之間相互比較，非補氧組細胞核數(shù)目最多，與50％、75％補氧組、間斷50％、75％補氧組比較差異有顯著意義(P<0．05)；與30％補氧組、間斷30％補氧組比較差異無顯著意義(P值分別為0．07，0．058)。 結論：1．在ROP形成第