銀杏葉提取物對6-OHDA誘導PC12細胞凋亡的保護作用.pdf

1、目的: 研究銀杏葉提取物（extract of ginkgo biloba, GBE）對6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine, 6-OHDA）誘導大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤細胞（Rat pheochromocytoma cell line，PC12細胞）凋亡的保護作用及其可能的分子機理。
　　 方法: 經(jīng)神經(jīng)生長因子誘導分化的PC12細胞用普通高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的細胞分為正常對照組（NS，完全DM

2、EM）, 6-OHDA組（6-OH，100 μmol/L 6-OHDA-完全DMEM）, GBE低劑量組（GL，10 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, GBE中劑量組（GM，20 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, GBE高劑量組（GH，40 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, 左旋多巴對照組（levodopa，L-DP，20 μmol/L L-DOPA-6-OHDA組培養(yǎng)液）。用四甲基偶氮唑鹽(meth

3、yl thiazolyl tetrazolium,MTT) 比色法測定PC12細胞的活力；流式細胞術測定PC12細胞的凋亡百分比；Hoechst 33342熒光染色觀察凋亡細胞核的形態(tài)學變化；分光光度法測定胞漿過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）的活性和總抗氧化能力（t

4、otal antioxidative capability，T-AOC）的水平；免疫印跡法測定胞漿內(nèi)p53、Bcl-2、Bax以及caspase-3的表達；酶聯(lián)免疫吸附試驗測定胞漿內(nèi)多巴胺（dopamine，DA）的含量；免疫印跡法和免疫組織化學染色法測定細胞酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）活性的變化。
　　 結果: 與正常對照組相比，6-OHDA組的PC12細胞活力明顯降低，細胞凋亡百分比明顯升高

5、（P<0.05），較多細胞出現(xiàn)典型的凋亡細胞核的形態(tài)學改變。與6-OHDA組相比，GBE低、中、高劑量組的PC12細胞活力增強，細胞凋亡百分比顯著降低（P<0.05），且隨GBE濃度增加作用更明顯，典型的凋亡細胞核也逐漸減少；GM組和GH組CAT, GSH-Px, T-SOD的活性和T-AOC的水平均顯著提高 (P<0.05 or P<0.01)，GL組僅T-SOD的活性及T-AOC水平升高，而GSH-Px和CAT的活性無明顯變化(P>

6、0.05)，而L-DP對上述抗氧化指標均無明顯作用(P>0.05)。GBE還能明顯升高PC12細胞TH的活性和胞內(nèi)DA的含量(P<0.05)。與6-OHDA組相比，GBE低、中、高劑量組Bcl-2的表達增加，Bax的表達降低，Bax/Bcl-2的比值明顯降低(P<0.05），p53和caspase-3 的表達降低(P<0.05），且均隨GBE劑量增加作用逐漸增強，L-DP組的Bax/Bcl-2的比值以及p53、caspase-3 的表達

7、也有所降低 (P<0.05)。
　　 結論: 6-OHDA能誘發(fā)PC12細胞凋亡；GBE能明顯抑制6-OHDA誘導的PC12細胞凋亡并對細胞有保護作用；GBE有很強的抗氧化能力，并能明顯降低Bax/Bcl-2的比值，抑制p53和caspase-3的活化。由此可見GBE可以通過其抗氧化作用明顯改善6-OHDA誘導的氧化應激狀態(tài)，糾正凋亡調節(jié)基因的異常表達及凋亡的重要執(zhí)行分子caspase-3的異?；罨碌木€粒體凋亡信號通路異常，