一氧化氮對桃果實脂氧合酶的調(diào)控作用.pdf

1、香氣賦予果實特征的風(fēng)味感官，構(gòu)成每種果實特有的“香氣特征譜”或“香氣指紋”，在果實風(fēng)味構(gòu)成中具有決定性作用。桃果實果實中的香氣物質(zhì)非常復(fù)雜，其中含有大量的揮發(fā)性的物質(zhì)，主要有醛類、醇類、酯類、內(nèi)酯類、萜類和酮類等。脂肪酸是形成一些果實香氣成分主要的前體物。脂肪酸途徑是大多數(shù)植物香氣物質(zhì)形成的主要來源，也是桃果實特征香氣物質(zhì)合成的主要途徑，通過該途徑可形成醇、醛、酯和內(nèi)酯。脂肪酸的合成途徑主要是脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）

2、途徑。LOX途徑是將亞油酸、亞麻酸反應(yīng)生成氫過氧化物，然后和氫過氧化物裂解酶（hydroperoxidelyase，HPL）反應(yīng)生成己醛或者己烯醛，醛類與醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）反應(yīng)生成相應(yīng)的醇類，醇類與醇?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyltransferases，AAT）反應(yīng)生成相應(yīng)的酯類。
　　為了考察一氧化氮（nitric oxide, NO）對貯藏過程中肥城桃果實香氣物質(zhì)合成的影響，

3、本文研究了NO對LOX途徑中的重要酶——LOX的調(diào)控作用。以采后肥城桃為材料，用不同濃度NO溶液處理生理成熟期的桃果實，考察了常溫和冷藏過程中不同處理的桃果實中LOX活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，桃果實LOX活性在常溫和冷藏過程中整體均呈上升趨勢。與對照相比，15μmol L-1 NO處理比5μmol L-1 NO和30μmol L-1 NO處理的活性更低，NO處理抑制了LOX活性。
　　從美國國家生物技術(shù)信息中心（National Ce

4、nter for Biotechnology Information, NCBI）獲取LOX家族基因的4個mRNA序列。通過該保守區(qū)序列設(shè)計出qPCR的兼并引物，從肥城桃的桃果實中提取出總RNA，并克隆獲得cDNA。以TUB為內(nèi)參，計算LOX-1、LOX-2、LOX-3和LOX-4拷貝數(shù)與TUB拷貝數(shù)之比。分析了LOX基因表達水平，常溫和冷藏過程中桃果內(nèi) LOX家族基因的表達量均呈下降趨勢。NO對 LOX-1、LOX-2、LOX-3基因

5、表達先促進后抑制，NO對LOX-4基因表達則是先抑制后促進，15μmol L-1 NO處理比5μmol L-1 NO和30μmol L-1 NO處理的效果更明顯。
　　構(gòu)建了LOX-2-pET-30a、LOX-3-pET-30a重組載體，導(dǎo)入大腸桿菌Transetta(DE3)進行蛋白表達。經(jīng)蛋白模擬分析，LOX的四種蛋白發(fā)生谷胱甘肽化反應(yīng)比發(fā)生亞硝基化反應(yīng)更容易進行，NO與LOX-1、LOX-2、LOX-3、LOX-4蛋白的活性