GM1對大鼠脊髓半切損傷后神經(jīng)功能修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)藥物GM1對損傷大鼠進(jìn)行腹腔注射，分析并評價(jià)其在脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)過程中的作用，探尋脊髓損傷后GM1給藥的最佳時(shí)間窗，并討論GM1對于損傷脊髓損傷修復(fù)作用的可能機(jī)制。 方法： 1、在顯微鏡下，利用自制的顯微刀片右側(cè)半橫斷切割損傷大鼠T10脊髓，建立脊髓半橫斷損傷模型。 2、12周齡雄性Wistar大鼠126只，隨機(jī)分為3組，即假手術(shù)組(只行椎板開窗，不行脊髓損

2、傷)、對照組(生理鹽水腹腔給藥)、治療組(GM1腹腔給藥)，除假手術(shù)組外均行脊髓半橫斷損傷，n=42。 3、所有動(dòng)物均選擇7個(gè)時(shí)間點(diǎn)，即：術(shù)前1天、術(shù)后立即、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后28天，術(shù)后按照體重比一次給藥，觀察并記錄大鼠的一般情況及BBB評分，持續(xù)至傷后12周。 4、各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取3只，均于給藥后2周，立體定向儀下，利用微量注射器行大腦感覺運(yùn)動(dòng)區(qū)BDA順行示蹤劑注射，并于注射BDA

3、2周后取脊髓病理標(biāo)本，快速冰凍后在熒光顯微鏡下觀察損傷脊髓附近的神經(jīng)軸突走行。 5、除注射BDA大鼠外其余各組大鼠均進(jìn)行4％多聚甲醛液心臟灌注，取損傷部位脊髓，進(jìn)行HE、GFAP等染色。觀察傷后脊髓形態(tài)、軸突再生、脊髓空洞、膠質(zhì)瘢痕增生等改變。 6、應(yīng)用顯微圖像分析軟件Image pro plus對BDA切片、GFAP切片，進(jìn)行分析處理。采用t檢驗(yàn)(student's t-test)比較兩組數(shù)據(jù)之間的差異性，用方差分析(

4、analysis of variance，ANOVA)比較多組數(shù)據(jù)間的差異性，p<0.05即認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01即認(rèn)為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、大鼠脊髓半橫斷模型成功穩(wěn)定，且傷口整齊，重復(fù)性好，損傷程度恒定，解剖定位準(zhǔn)確，功能障礙亦確定，便于進(jìn)行SCI的基礎(chǔ)理論研究和神經(jīng)生物學(xué)的研究。 2、術(shù)前所有動(dòng)物BBB評分均為21分，手術(shù)動(dòng)物損傷后1天內(nèi)均呈右下肢癱瘓，隨后開始逐漸恢復(fù)，隨著時(shí)間

5、的推移各組動(dòng)物評分均逐漸增加，但各組之間恢復(fù)的程度不同。傷后3d-2w這一階段BBB評分增加速度最快，2w-5w這一階段增速仍較快，傷后5w-8wBBB評分增幅逐漸緩慢，8w以后BBB評分不再明顯改變。與對照組對比分析BBB評分變化可以看出：脊髓損傷后0-14天GM1給藥，能夠促進(jìn)大鼠BBB評分增加，兩者數(shù)據(jù)差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；脊髓損傷超過14天GM1給藥，對大鼠BBB評分改變影響不大，兩者數(shù)據(jù)差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0

6、.05)。假手術(shù)組動(dòng)物各時(shí)間點(diǎn)BBB評分都為21分。 3、BDA皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)纖維順行示蹤結(jié)果顯示，假手術(shù)組脊髓軸突顯色清晰、著色均勻，各時(shí)間點(diǎn)沒有變化，能夠順利通過T10段脊髓下行。對照組和治療組損傷脊髓處可以看到較為明顯的脊髓半橫斷痕跡，在損傷處有熒光顯色劑濃集，對照組神經(jīng)纖維極少突破損傷脊髓下行，術(shù)后≤2周內(nèi)GM1給藥動(dòng)物神經(jīng)纖維可以通過損傷脊髓下行，術(shù)后>2周GM1給藥組動(dòng)物軸突下行不明顯。傷后>2周動(dòng)物治療組和對照組著

7、色都不明顯，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、GFAP在假手術(shù)組表達(dá)很少，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)沒有變化。脊髓損傷動(dòng)物術(shù)后1～14天GFAP表達(dá)持續(xù)增加，對照組和GM1治療組差別不明顯。術(shù)后≤2周GM1給藥組動(dòng)物，在脊髓損傷2周以后GFAP表達(dá)開始減少，而對照組變化不明顯，兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后>2周GM1給藥組和對照組GFAP表達(dá)差別不大，但都呈增高表現(xiàn)。 結(jié)論： 1、顯微鏡下制作的Wistar大鼠T10段脊髓半橫斷模型，損

8、傷程度恒定，解剖定位準(zhǔn)確，功能障礙確定，重復(fù)性好。 2、術(shù)后14天內(nèi)GM1給藥有助于脊髓損傷大鼠BBB運(yùn)動(dòng)功能評分增加，尤以術(shù)后7天內(nèi)給藥效果更好。術(shù)后>2周GM1給藥對動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)效果不明顯。 3、脊髓損傷早期應(yīng)用GM1有助于再生軸突穿過損傷脊髓下行，應(yīng)用BDA順行示蹤技術(shù)觀察到神經(jīng)軸突在脊髓內(nèi)的走行，傷后>2周應(yīng)用GM1效果不明顯。 4、GM1腹腔給藥能夠減輕損傷大鼠脊髓半橫斷處GFAP的形成，緩解膠質(zhì)瘢