細菌基序及部分色素調節(jié)劑對黑素細胞的影響.pdf

1、1學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是本人在導師指導下獨立進行實驗研究工作所取得的成果，本論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或已經(jīng)獲取得的研究成果。在本論文撰寫中所引用其他研究者的研究內容和成果時已在論文中給予特別標注和明確說明。對本論文的實驗研究過程中給予幫助的其他人士，以及論文撰寫中所提供的建議等的貢獻也已作了致謝說明。本人完全理解本聲明的法律責任，以及所涉及的結果將由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日關于學位論文著作權

2、共享聲明根據(jù)《中華人民共和國著作權法》和《高等院校知識產(chǎn)權管理條例》，本學位論文，題目：細菌基序及部分色素調節(jié)劑對黑素細胞的影響細菌基序及部分色素調節(jié)劑對黑素細胞的影響，是研究生在導師指導下完成的職務作品，得到蚌埠醫(yī)學院相關部門科室的物質技術和經(jīng)費支持，因此，本學位論文的著作權由研究生，導師和蚌埠醫(yī)學院三方共同享有，均享有署名權和使用權等權益；本學位論文成果歸屬蚌埠醫(yī)學院。根據(jù)國家學位授予條例，學校對本學位論文有使用權，包括保存本學位論

3、文；因教學和科研的目的，保留在圖書館被查閱或借閱；學?？筛鶕?jù)國家規(guī)定將本學位論文送交國家有部門保留和使用。學校在公布本學位論文的全部或部分內容時，應保障研究生和導師的署名權等權益。研究生和導師在公開發(fā)表本學位論文的全部或部分內容時必須保障學校的署名權等權益，即在發(fā)表論文時蚌埠醫(yī)學院及相關部門科室應署名為作者單位。聲明人完全理解本聲明的法律責任。3細菌基序及部分色素調節(jié)劑對黑素細胞的影響研究生：薛東章導師：張汝芝中文摘要目的：研究細菌基序

4、（CpGoligodeoxynucleotideCpGODN）和部分色素調節(jié)劑對鼠黑素瘤細胞B16、鼠永生化黑素細胞melana、正常人表皮黑素細胞（melanocyteMC）的形態(tài)、黑素生成及炎性因子分泌的影響。定位并分離培養(yǎng)人毛囊內黑素細胞（humanfolliclemelanocytesHFM），為尋找體外刺激HFM增殖活化的CpGODN和藥物奠定基礎。方法：不同濃度的CpGODN、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocat

5、echingallateEGCG）、氫醌（hydroquinoneHQ）、煙酰胺（nicotinaeNAA）、α促黑素細胞激素（αmelanocytestimulatinghmoneαMSH）和維生素C磷酸酯鎂（magnesiumLbert2phosphateAPMg）分別干預體外培養(yǎng)的3種黑素細胞，即B16、melana及正常人MC，作用不同時間后，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化；甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetraz

6、olium，MTT）還原法檢測細胞活性；多巴氧化法測定酪氨酸酶活性；逆轉錄聚合酶鏈反應（reversetranionpolymerasechainreactionRTPCR）法檢測酪氨酸酶的mRNA表達；氫氧化鈉（sodiumhydroxideNaOH）裂解法測黑素生成；酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosbentassayELISA）檢測細胞培養(yǎng)上清中炎性因子即前列腺素E2和F2α（prostaglinE2F2αP

7、GE2PGF2α）水平。獲取胎兒頭皮（畸形引產(chǎn)，死亡2小時內），制備冰凍切片，用黑素細胞的特異性標記，NKIbeteb和HMB45抗體，免疫熒光染色，激光共聚焦顯微鏡觀察攝片。膠原酶Ⅱ消化頭皮，游離毛囊，0.25%胰酶EDTA消化毛囊，制備單細胞懸液，進行培養(yǎng)。結果：（1）B16細胞：CpGODN干預24h后，5μgmlCpGODN促進細胞增殖；但10μgml組對細胞增殖無顯著影響；15μgml組則抑制細胞增殖。干預48h后，各濃度組細