枳椇子水提取液對乙醇體外誘導(dǎo)肝細(xì)胞株L02細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、目的:
　　 建立不同濃度乙醇誘導(dǎo)的體外肝細(xì)胞損傷模型，探討不同濃度乙醇對L-O2細(xì)胞肝酶泄漏量、氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化及NF-KB1(P65)蛋白表達(dá)的影響。并確定枳椇子水提取液對乙醇誘導(dǎo)的體外肝細(xì)胞損傷是否有防治作用及其機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用MTT法篩選乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的適宜濃度(0.3％、0.6％、1.2％、2.4％)，選擇最適濃度的枳椇子水提取液對損傷模型進(jìn)行干預(yù)，原位裝載探針法測定細(xì)胞內(nèi)ROS

2、水平，全自動(dòng)生化儀檢測培養(yǎng)上清液ALT、AST泄露量，試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)MDA、GSH含量，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞內(nèi)NF-KB1(P65)蛋白的表達(dá)強(qiáng)度及定位。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT法示當(dāng)乙醇濃度低于0.2％時(shí)細(xì)胞成活率比正常組稍高。當(dāng)乙醇濃度大于0.3％時(shí)，細(xì)胞存活率隨濃度升高而降低但均大于80％。當(dāng)乙醇濃度大于2.4％時(shí)，與正常組相比細(xì)胞存活率下降最明顯(P＜0.05)且大部分細(xì)胞漂浮，因此選定0.3％-2.

3、4％濃度為最適損傷濃度。
　　 2.ROS結(jié)果顯示正常組細(xì)胞內(nèi)可見少量較弱熒光。隨乙醇濃度增加熒光增多增強(qiáng)，2.4％乙醇組最強(qiáng)，但細(xì)胞數(shù)量減少。加入枳椇子水提取液治療后各組熒光均減弱。
　　 3.乙醇干預(yù)肝細(xì)胞后培養(yǎng)上清液ALT、AST均比正常組升高(P＜0.05)，且隨乙醇濃度升高而升高。加入枳椇子水提取液治療后均下降(P＜0.05)。
　　 4.乙醇作用于肝細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)MDA均比正常組升高(P＜0.05)，且

4、隨乙醇濃度升高而升高。而GSH則比正常組下降(P＜0.05)，且隨乙醇濃度升高不斷下降。加入枳椇子水提取液治療后MDA均下降而GSH均升高(P＜0.05)。
　　 5.免疫細(xì)胞化學(xué)示正常組肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有少量NF-KB1(P65)蛋白表達(dá)。隨乙醇濃度增加，胞漿胞核內(nèi)該蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)，但1.2％乙醇組與2.4％乙醇組無明顯差異(P＞0.05)。枳椇子水提取液治療后表達(dá)減弱(P＜0.05)。
　　 結(jié)論: