GPER激動劑G-1以不依賴GPER的方式抑制卵巢癌和乳腺癌細(xì)胞的增殖.pdf

1、G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor1，GPER)是最近新發(fā)現(xiàn)的一種膜相關(guān)的雌激素受體。它的作用方式和效果與傳統(tǒng)的核受體雌激素受體ERα和ERβ均不相同，是一種可以獨(dú)立介導(dǎo)雌激素作用的新型雌激素受體。GPER在多種組織包括腫瘤中均有表達(dá)，在不同的生理/病理?xiàng)l件下扮演著十分重要的角色。G-1一直被認(rèn)為是GPER的選擇性激動劑，用以區(qū)別GPER介導(dǎo)的雌激素作用和傳統(tǒng)雌激素受體ER介導(dǎo)的

2、雌激素作用。然而，G-1結(jié)合與活化GPER作用的機(jī)制仍然不清楚，目前關(guān)于GPER介導(dǎo)G-1影響癌細(xì)胞生長的研究存在很大的爭論，一些研究小組證明G-1通過激活GPER進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的生長，而另一些研究卻恰恰相反，證實(shí)G-1能夠抑制癌細(xì)胞的增殖與遷移。
　　 為闡明G-1對卵巢顆粒細(xì)胞癌增殖的作用及作用機(jī)制，本研究利用人類卵巢顆粒細(xì)胞瘤(GCT)細(xì)胞系(KGN)為細(xì)胞模型，運(yùn)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)降低目的基因表達(dá)，蛋白印跡技術(shù)

3、檢測目的蛋白的表達(dá)量，細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞增殖，MTT法檢測細(xì)胞活性，Caspase3/7試劑盒檢測細(xì)胞凋亡蛋白，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。
　　 1.用GPER的選擇性激動劑G-1處理KGN細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)G-1抑制KGN細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)敲落KGN細(xì)胞中GPER的表達(dá)后，細(xì)胞生長變慢，表明GPER具有刺激KGN細(xì)胞生長的作用。顯然，GPER促進(jìn)細(xì)胞增殖與GPER的激動劑G-1抑制細(xì)胞增殖相矛盾。因此，

4、我們假設(shè)G-1可能通過某種不依賴GPER的方式抑制KGN細(xì)胞的增殖;
　　 2.為了驗(yàn)證假設(shè)，運(yùn)用RNAi技術(shù)敲落KGN細(xì)胞的GPER表達(dá)后，用G-1再處理這種敲落GPER的KGN細(xì)胞，結(jié)果顯示，G-1仍然抑制KGN細(xì)胞增殖;說明G-1可能不通過激活GPER而抑制KGN細(xì)胞增殖;
　　 3.為了進(jìn)一步驗(yàn)證假設(shè)，我們利用GPER的選擇性拮抗劑G15(最近被發(fā)現(xiàn)的一種不與傳統(tǒng)核型雌激素相互作用卻能夠特異結(jié)合GPER但不激活G

5、PER的拮抗劑）預(yù)處理KGN細(xì)胞，然后再用G-1處理細(xì)胞，若G-1通過GPER的介導(dǎo)抑制KGN細(xì)胞增殖，那么G15應(yīng)該能夠阻止或者部分阻止G-1對KGN細(xì)胞增殖的抑制作用。但是實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，G15的存在并不能阻止G-1對KGN細(xì)胞增殖的抑制，說明G-1抑制細(xì)胞增殖并不是通過激活GPER而實(shí)現(xiàn)的;
　　 4.更進(jìn)一步的驗(yàn)證與推廣假設(shè)，我們使用G-1處理了另外兩種無GPER表達(dá)的細(xì)胞系:人類胚胎腎細(xì)胞HEK-293以及乳腺癌細(xì)胞M

6、DA-MB-231，結(jié)果顯示，G-1可抑制這兩種細(xì)胞系增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，再次表明G-1以某種不依賴GPER的機(jī)制抑制細(xì)胞增殖。
　　 綜上所述，本研究表明GPER調(diào)節(jié)KGN細(xì)胞的增殖，但GPER激動劑G-1以一種不依賴GPER的方式抑制卵巢癌細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞的生長，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其具體機(jī)制尚不清楚。由于其對腫瘤細(xì)胞增殖有顯著的抑制效果，G-1很有可能發(fā)展成為一種新型的卵巢癌和乳腺癌治療藥物，在癌癥治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景