降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)去甲腎上腺素誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：相關(guān)研究表明，在急性心肌缺血時(shí)心肌組織中降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、去甲腎上腺素(NE)水平都明顯升高，腎上腺素能系統(tǒng)與感覺(jué)神經(jīng)都參與了心肌缺血的損傷與保護(hù)，然而其作用機(jī)制尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)欲從細(xì)胞水平闡述其作用，及其機(jī)制。
　　 目的：觀察降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)對(duì)去甲腎上腺素(NE)誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響，及其與PKA、PKC信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的關(guān)系。
　　 內(nèi)容及方法：
　　 (1)心肌細(xì)胞的培

2、養(yǎng)及鑒定。實(shí)驗(yàn)選用1-3 d齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色(SABC法)對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 (2)CGRP對(duì)NE誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡的影響采用NE與PKA抑制劑H89、CGRP、CGRP受體拮抗劑CGRP8-37配伍，形成以下組合：對(duì)照組(C組)、NE(10-5M)組、NH(NE10-5M+H893×10-5M)組、NC組(NE10-5M+CGRP10-8

3、M)、NC8組(NE10-5M+CGRP10-8M+CGRP8-3710-7M)，用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡，計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡率。
　　 (3)CGRP對(duì)NE誘導(dǎo)心肌細(xì)胞PKA信號(hào)途徑的影響分組同實(shí)驗(yàn)2，提取培養(yǎng)心肌細(xì)胞蛋白，用無(wú)反射性試劑盒檢測(cè)各組PKA活性
　　 (4)CGRP對(duì)NE誘導(dǎo)心肌細(xì)胞PKC信號(hào)途徑的影響分為C組、NE組、NC組、NC8組(具體同實(shí)驗(yàn)2)，提取培養(yǎng)心肌細(xì)胞蛋白，用無(wú)反射性試劑盒檢測(cè)各組P

4、KC活性
　　 結(jié)果:
　　 (1)心肌細(xì)胞培養(yǎng)成功，可見(jiàn)同步化搏動(dòng)心肌細(xì)胞，免疫組化鑒定成功，98％以上細(xì)胞為心肌細(xì)胞。
　　 (2)a：與對(duì)照組相比，NE組、NC8組細(xì)胞凋亡率顯著升高；b：與NE組比較，NH組、NC組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P＜0.05)。
　　 (3)a：與對(duì)照組相比，NE組、NC組PKA活性升高，NH組PKA活性降低(P＜0.05)；b：.NC組、NC8組與NE組的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P＞0.05)；c：.NC組與NC8組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (4)a：與對(duì)照組比較，NE組、NC組、NC8組PKC活性均增高(P＜0.05)；b：NE組、NC組、NC8組之間PKC活性無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.PKA信號(hào)通路可能參與NE誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。
　　 2.CGRP有拮抗NE誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡作用。
　　 3.CGRP不是通過(guò)對(duì)PKA或者P