小凹與小凹蛋白-1介導(dǎo)ox-LDL的攝取及跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn).pdf

1、目的：研究氧化低密度脂蛋白跨內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的方式，試圖揭示caveolae在膽固醇流出中的作用機(jī)制，并探討caveolin-1與內(nèi)皮細(xì)胞膽固醇攝取間存在的關(guān)系，尋找是否存在調(diào)節(jié)關(guān)系。 方法：用40μg/ml氧化低密度脂蛋白處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間，分別用熒光和HPLC觀察細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量變化；隨后將已用氧化低密度脂蛋白荷脂的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，撤去氧化低密度脂蛋白后再觀察細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量變化。分別用三種caveolae阻滯劑ca

2、rrageenan、filipin、nocodazole預(yù)處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞1h后與40μg/ml氧化低密度脂蛋白孵育24h，用熒光倒置顯微鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞荷脂情況。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞種植于transwell培養(yǎng)系統(tǒng)套皿上層，分別用三種阻滯劑預(yù)處理細(xì)胞1h后加入40μg/mlDiI熒光標(biāo)記的氧化低密度脂蛋白于套皿上層孵育24h，取套皿下層液體用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光值。用FITC標(biāo)記LOX-1后，用nocodazole阻滯cavolae運(yùn)

3、動(dòng)，用熒光倒置顯微鏡觀察LOX-1的運(yùn)動(dòng)情況。利用caveolin-1 SiRNA干擾技術(shù)沉默內(nèi)皮細(xì)胞caveolin-1表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞在氧化低密度脂蛋白作用下NF-κB和LOX-1的表達(dá)情況。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)表明人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與氧化低密度脂蛋白孵育時(shí)，細(xì)胞荷脂呈時(shí)間依賴(lài)性增加，撤去氧化低密度脂蛋白后細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)逐漸減少。Caveolae阻滯劑可明顯阻滯內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)ox-LDL攝取，同時(shí)也可明顯阻滯氧化低密度脂蛋白跨內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)

4、運(yùn)達(dá)49％, 72％ 和 80％。免疫熒光結(jié)果表明LOX-1定位于caveolae中。SiRNA干擾實(shí)驗(yàn)表明沉默caveolin-1表達(dá)后，抑制了NF-κB核轉(zhuǎn)位，同時(shí)LOX-1表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論： 1.內(nèi)皮細(xì)胞可攝取ox-LDL而荷脂，也可自發(fā)性流出所荷脂質(zhì)。內(nèi)皮細(xì)胞的ox-LDL受體-LOX-1-定位于caveolae中，caveolae在內(nèi)皮細(xì)胞攝取ox-LDL的過(guò)程中起了一個(gè)運(yùn)載體的作用，它同時(shí)也介導(dǎo)了ox-LD