致豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測(cè)方法及三價(jià)滅活菌苗研究.pdf

1、本研究主要開(kāi)展了致豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測(cè)方法建立，豬水腫病三價(jià)油乳劑滅活菌苗研究等方面的工作，具體研究?jī)?nèi)容如下： 1．參照GenBank上發(fā)表的水腫毒素(類志賀氏毒素II型變異體SLT-IIe)B亞基和黏附素F18ab菌毛FedA的基因序列，設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，建立了一種對(duì)致豬水腫病大腸桿菌的兩個(gè)致病因子(SLT-IIe和F18ab)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增的二重PCR檢測(cè)方法，該P(yáng)CR方法最低檢出菌量為10<'1>CFU。運(yùn)用建立的致

2、豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測(cè)方法，從臨床分離的170株致病性大腸桿菌中鑒定出6株致豬水腫病大腸桿菌；對(duì)其進(jìn)行O抗原血清型鑒定，3株為O<,139>，2株為O<,138>，1株為O<,74>。 2．以SPF級(jí)昆明小鼠作為動(dòng)物模型，對(duì)鑒定的6株致豬水腫病大腸桿菌進(jìn)行毒力測(cè)定。確定血清型O<,74>菌株WH1、血清型O<,138>菌株WH29、血清型O<,139>菌株WH355疫苗的種子菌株。 3．用篩選確定的種子菌(血清型

3、O<,74>菌株WH1、血清型O<,138>菌株WH29、血清型O<,139>菌株WH3)制備豬水腫病三價(jià)油乳劑滅活菌苗，免疫SPF級(jí)昆明小鼠，進(jìn)行免疫效力試驗(yàn)。每只小鼠皮下注射0.2mL菌苗，首免21天后二免，第二次免疫14天后，用相應(yīng)血清型的菌株攻毒，結(jié)果表明該疫苗對(duì)免疫小鼠的保護(hù)率在87.5％以上。 4．用制備的豬水腫病三價(jià)油乳劑滅活菌苗免疫斷奶仔豬，進(jìn)行安全性、免疫效力、免疫期試驗(yàn)和抗體消長(zhǎng)檢測(cè)。仔豬免疫接種后1個(gè)星期，

4、體溫、食欲、精神狀態(tài)沒(méi)有明顯改變；每頭仔豬頸部肌肉注射2mL菌苗，首免21天后二免，第二次免疫14天后，用相應(yīng)血清型的菌株攻擊，效力試驗(yàn)結(jié)果表明該疫苗對(duì)仔豬的保護(hù)率均在80％以上；抗體消長(zhǎng)曲線表明仔豬免疫接種后2周開(kāi)始產(chǎn)生抗體，至4周時(shí)抗體水平已超過(guò)有效免疫保護(hù)的抗體水平，且能維持較高水平至180天以上。 本研究建立的二重PCR檢測(cè)方法為豬水腫病臨床診斷、病原的分離、鑒定提供了方法；運(yùn)用該方法鑒定出6株致豬水腫病大腸桿菌，為進(jìn)一