大豆凝集素在不同種屬動(dòng)物體內(nèi)的消化動(dòng)力學(xué)及抗?fàn)I養(yǎng)作用比較研究.pdf

1、本論文研究了大豆凝集素的提純、檢測和在反芻動(dòng)物(羊)、肉食動(dòng)物(狗)、嚙齒動(dòng)物(兔)、雜食動(dòng)物(豬)和禽類(雞)等不同種屬動(dòng)物體內(nèi)的消化動(dòng)力學(xué)及抗?fàn)I養(yǎng)作用，共包括四個(gè)部分。不同種屬動(dòng)物都選取雄性半性成熟年齡。 為獲得大量純品大豆凝集素，采用N-乙?；?D-半乳糖胺-epoxv-sepharose 6B親和層析體系和瓜爾膠親和層析體系提純了大豆凝集素，并對兩種方法進(jìn)行了多方面的比較和篩選。經(jīng)鑒定(SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和紅細(xì)胞

2、凝集試驗(yàn))，用兩種方法提純的大豆凝集素純度和生物活性均與大豆凝集素標(biāo)準(zhǔn)品一致，但兩種親和層析體系純化大豆凝集素的產(chǎn)率和的親和飽和度均顯著差異(P<0.05)。這一結(jié)果表明提純大豆凝集素較理想的方法是N-乙?；?D-半乳糖胺-expoxy-sepharose6B親和層析體系。用提純的大豆凝集素制備了兔抗大豆凝集素多克隆抗體，并建立了大豆凝集素的間接抑制ELISA定量檢測方法，檢測下限低于10ng/mL，靈敏可靠，能滿足整個(gè)研究的需要。

3、 比較研究了大豆凝集素在不同種屬動(dòng)物腸道不同區(qū)段食糜中的免疫活性殘留規(guī)律。日糧中含20％的生大豆，并添加1％的Cr<,2>O<,3>作為外源指示劑。經(jīng)過兩周的飼養(yǎng)試驗(yàn)，于最后一次飼喂2 h后麻醉放血，立即取十二指腸、空腸前、空腸中、空腸后、回腸、盲腸、結(jié)腸(雞為結(jié)直腸)各腸段內(nèi)的食糜，-20℃凍存待測。食糜和飼料中的大豆凝集素采用試驗(yàn)一建立的方法檢測，食糜和飼料中的總Cr采用原子吸收光譜法檢測。結(jié)果表明，同一種動(dòng)物不同腸段內(nèi)的大豆凝

4、集素殘留率不同，總的趨勢是由前向后呈下降趨勢，各腸段內(nèi)都能檢測到大豆凝集素。其中，由十二指腸到空腸前段的殘留率變化在五種動(dòng)物均最顯著(P<0.05)。在不同動(dòng)物的同一區(qū)段腸道內(nèi)，大豆凝集素的殘留率隨動(dòng)物的不同而有差異，兔各腸段中的殘留率均最低，十二指腸到空腸后段羊和雞的殘留率相對較高，豬和狗的殘留率介于中間?？漳c之后，豬、羊和雞的殘留率較高。 在體外模擬胃/腸環(huán)境下研究了大豆凝集素的降解規(guī)律。將不同濃度(1、2、3、4和5mg/

5、mL)的大豆凝集素分別與等體積的模擬胃液、模擬腸液混合(37℃)，于不同時(shí)間(15s、30s、60s、2min、4min、8min、15min、30min、60min)終止反應(yīng)，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和試驗(yàn)一建立的ELISA兩種方法檢測反應(yīng)體系中剩余的大豆凝集素。結(jié)果顯示，胃蛋白酶降解大豆凝集素主要發(fā)生在反應(yīng)的初始階段，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長降解速率逐漸變慢，但反應(yīng)一直在進(jìn)行；隨著大豆凝集素濃度從1mg/mL增加到5mg/mL，其降解

6、速度一直在增加，但徹底降解所需的時(shí)間延長，完全降解的時(shí)間范圍分布在9.5min到23min之間。胰蛋白酶對完整的大豆凝集素不產(chǎn)生降解作用。 用不同濃度(0.5、1.0和3.0 mg/mL)純化的大豆凝集素對麻醉狀態(tài)下的上述五種動(dòng)物進(jìn)行活體小腸結(jié)扎灌注(8 h)，進(jìn)一步比較研究了大豆凝集素在不同種屬動(dòng)物空腸內(nèi)的吸附、吸收和殘留之間的相互關(guān)系及其對小腸組織結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明，大豆凝集素在不同種屬動(dòng)物小腸內(nèi)的吸附、吸收和殘留規(guī)律不盡

7、相同。兔的吸收率最大，殘留率較??；相反，羊的殘留率最大，吸收率最小。雞的情況同兔基本一致，但二者相比兔的殘留較少而吸收較多。與兔和雞相比，豬和狗的吸附能力均較大，而吸收能力較小。各種動(dòng)物均對較低濃度的大豆凝集素有較強(qiáng)的吸收能力。 本論文的研究表明，大豆凝集素在不同種屬動(dòng)物及其不同腸段內(nèi)的殘留規(guī)律不同，所選五種動(dòng)物由十二指腸到空腸大豆凝集素消失得最快，表明動(dòng)物對大豆凝集素的吸附、吸收和/或降解主要發(fā)生在小腸前部。動(dòng)物的胃蛋白酶對大

8、豆凝集素有一定程度的降解，但降解需要一定時(shí)間。胰蛋白酶對完整的大豆凝集素不產(chǎn)生降解作用。不同種屬動(dòng)物小腸黏膜對大豆凝集素的敏感性和耐受性不同，反芻動(dòng)物小腸黏膜對大豆凝集素的敏感性較低，單胃動(dòng)物對大豆凝集素的吸收和吸附能力大于反芻動(dòng)物。單胃動(dòng)物中，兔對大豆凝集素吸收能力最強(qiáng)，表明其小腸黏膜對大豆凝集素的通透性最大，更易于引起因吸收大豆凝集素而造成的抗?fàn)I養(yǎng)作用。雞與兔的趨勢基本一致，不過雞的小腸黏膜對大豆凝集素的吸收能力不如兔。豬和狗的小腸