血清microRNA用于非小細(xì)胞肺癌術(shù)后評估的研究.pdf

1、背景和目的：
　　肺癌是世界范圍內(nèi)癌癥的首位死因，非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lungcancer，NSCLC)占肺癌發(fā)病人數(shù)的80％。即使NSCLC患者已接受規(guī)范性腫瘤全切和區(qū)域淋巴結(jié)清掃手術(shù)，仍有約40％在5年內(nèi)復(fù)發(fā)。因此，檢測患者體內(nèi)的腫瘤負(fù)荷，有助于評估手術(shù)切除是否完全，為評價患者術(shù)后是否需要進(jìn)一步放化療提供輔助參考依據(jù)，從而降低患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險。miRNA是一類長度約22個核苷酸的內(nèi)源性的非編碼單鏈小分子R

2、NA，通過翻譯抑制或特異性的切割兩種機(jī)制在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮調(diào)控作用，參與調(diào)節(jié)高達(dá)30％的人類基因。目前研究發(fā)現(xiàn)在食管癌、胃癌和結(jié)直腸癌等患者術(shù)前血清中表達(dá)量增高的部分miRNA在術(shù)后血清中明顯降低，這些miRNA可能與腫瘤負(fù)荷相關(guān)，可以用于評價手術(shù)切除是否完全。至今為止，有關(guān)血清miRNA是否能夠預(yù)測NSCLC患者的手術(shù)療效尚無文獻(xiàn)報道。
　　我們的研究目的是通過檢測NSCLC患者術(shù)前和術(shù)后血清miRNA的表達(dá)變化，并對NSCLC患

3、者進(jìn)行隨訪，篩選出一組差異表達(dá)的miRNA作為潛在的生物學(xué)標(biāo)志物用于NSCLC患者的術(shù)后評估。
　　方法：
　　本研究收集45例經(jīng)術(shù)后病理確診的NSCLC患者的術(shù)前和術(shù)后血清樣本。術(shù)前血采集時患者均未行任何治療(包括手術(shù)、放療和化療等)，相應(yīng)的術(shù)后血均采集于術(shù)后7-10天。從中選擇Ⅰ-Ⅲ期患者各6例，各取1ml血清混合并提取Total RNA，用Taqman低密度芯片(TaqMan Low Density Array，TLD

4、A)檢測術(shù)前和術(shù)后混合血清樣本的miRNA表達(dá)差異，選出部分差異表達(dá)miRNA用RT-qPCR技術(shù)在45例NSCLC單個樣本中進(jìn)行驗證，進(jìn)一步篩選出一組具有穩(wěn)定差異表達(dá)的血清miRNA。對45例NSCLC患者進(jìn)行隨訪(每3個月一次)，探索miRNA下降與否與NSCLC患者的預(yù)后是否相關(guān)。
　　結(jié)果：
　　本研究第一階段采用TLDA檢測技術(shù)共檢測miRNA754種，其中在術(shù)前組和/或術(shù)后組中表達(dá)的miRNA共266種。根據(jù)篩選

5、標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示術(shù)后組和術(shù)前組相比具有表達(dá)差異的miRNA共有202種，其中表達(dá)下調(diào)的miRNA有180種，表達(dá)上調(diào)的miRNA有22種。結(jié)合實驗室前期研究結(jié)果及既往文獻(xiàn)報道情況對TLDA檢測結(jié)果中20個差異表達(dá)的血清miRNA以單個血清樣本通過RT-qPCR進(jìn)行驗證(45例NSCLC患者)，得到5種血清miRNA在術(shù)后表達(dá)量比術(shù)前明顯下降，包括miR-24、miR-34a、miR-155、miR-199a-5p和miR-221。

6、在術(shù)前CEA正常的NSCLC患者中，miR-24、miR-155和miR-199a-5p3種miRNA下降與未下降者相比無病生存期(disease-free survival，DFS)表現(xiàn)出一定的差異趨勢。另外，在腺癌患者中，miR-24和miR-34a下降與未下降者相比DFS有明顯差異，miR-155下降與未下降者相比DFS表現(xiàn)出一定的差異趨勢，但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　通過TLDA檢測技術(shù)對混合血清樣本的檢測

7、及RT-qPCR技術(shù)在單個樣本中的驗證，檢測出5種血清miRNA在NSCLC患者術(shù)后血清中表達(dá)量較術(shù)前血清明顯降低，提示這些miRNA的表達(dá)水平可能與NSCLC患者的腫瘤負(fù)荷相關(guān)，有可能成為潛在的生物學(xué)標(biāo)志物用于輔助評價術(shù)后腫瘤殘留負(fù)荷，進(jìn)一步的隨訪結(jié)果提示miR-24、miR-155、miR-199a-5p聯(lián)合檢測可能成為術(shù)前CEA正常患者術(shù)后評估的潛在標(biāo)志物，miR-24、miR-34a、miR-155聯(lián)合檢測可能成為AC患者術(shù)后評