環(huán)孢素A(CsA)對(duì)體外培養(yǎng)人系膜細(xì)胞增殖的影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 1、觀察環(huán)孢素A(CsA)對(duì)人系膜細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響,及對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1、cyclinE、p27kip1表達(dá)的影響;
　　 2、初步探討CsA對(duì)人系膜細(xì)胞增殖的影響機(jī)制。
　　 方法：
　　 3、7℃恒溫水浴箱中復(fù)蘇凍存的系膜細(xì)胞,并將細(xì)胞移入50ml培養(yǎng)瓶中置于37℃、5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)系膜細(xì)胞生長(zhǎng)至80％貼壁時(shí),傳代并繼續(xù)培養(yǎng),傳至3-4代后,細(xì)胞活力較強(qiáng)

2、,用于實(shí)驗(yàn)。
　　 分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度CsA(0.1,1,5μmol/L),對(duì)照組不加CsA處理。第一步實(shí)驗(yàn):用MTT法在490nm波長(zhǎng)處檢測(cè)不同濃度的CsA分別作用24h、48h、72h后的吸光度值,觀察藥物對(duì)系膜細(xì)胞增殖抑制作用。第二步實(shí)驗(yàn):不同濃度的CsA作用48h后,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期Go/Gi(DNA合成前期)與S(DNA合成期)的影響。第三步實(shí)驗(yàn):不同濃度的CsA作用48h后,提取細(xì)胞蛋白,

3、Westemblot法檢測(cè)細(xì)胞中cyclinD1、cyclinE、p27kip1蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、不同濃度CsA作用24h,48h,72h后,隨著CsA濃度的增加及時(shí)間的延長(zhǎng),人系膜細(xì)胞的增殖抑制越來(lái)越明顯;與對(duì)照組相比,各濃度均有明顯抑制作用,且不同藥物濃度均以72h抑制作用最為明顯,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、CsA可阻滯細(xì)胞周期,使Go/Gi期細(xì)胞比增多,S期細(xì)胞

4、比減少,且隨著藥物濃度的增加,Go/Gi期所占百分比逐漸增高,S期所占百分比逐漸降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、系膜細(xì)胞經(jīng)CsA處理48h后,Westom印跡檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組cyclinDl、cyclinE蛋白表達(dá)下降、p27kip1蛋白表達(dá)升高;且實(shí)驗(yàn)組隨CsA濃度的增加,cyclinDI、cyclinE蛋白表達(dá)遞減、p27kiP1蛋白表達(dá)遞增,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。