黃淮海大豆高異黃酮種質(zhì)篩選與相關(guān)基因差異表達(dá)分析.pdf

1、大豆(Glycine max L.)是我國(guó)廣泛種植的經(jīng)濟(jì)作物，具有豐富的蛋白質(zhì)和脂肪，其子粒中含有的生理活性物質(zhì)——異黃酮更是被廣泛應(yīng)用于保健行業(yè)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。異黃酮屬于生物黃酮的一種，只能在植物體內(nèi)合成。本研究利用高效液相色譜技術(shù)(HPLC)分析黃淮海生態(tài)區(qū)大豆品種資源子粒異黃酮含量，遴選高、低異黃酮含量特異種質(zhì);在此基礎(chǔ)上，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析異黃酮代謝途徑相關(guān)基因在高、低異黃酮含量品種中的差異表達(dá)，尋找關(guān)鍵基因;并利用RNAi

2、技術(shù)將低異黃酮含量大豆品種的異黃酮合成重要分支基因進(jìn)行沉默。主要研究結(jié)果如下:
　　1.利用精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率試驗(yàn)，確定了HPLC方法及條件。精密度試驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.96％、1.53％和1.31％;重現(xiàn)性試驗(yàn)的RSD分別為1.89％、1.85％和1.65％;日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為1.76％、0.89％和1.27％，日間穩(wěn)定性RSD分別為0.98％、1.28％和1.02％;大豆苷、黃豆黃苷和染料木苷的加標(biāo)

3、回收率分別為98.91％、99.93％和101.46％，相對(duì)應(yīng)的RSD值為1.42％、1.89％和1.73％。可見(jiàn)，該方法可靠性高、穩(wěn)定性強(qiáng)，可用于大豆異黃酮測(cè)定。
　　2.利用HPLC技術(shù)測(cè)定了黃淮海生態(tài)區(qū)213份大豆品種資源異黃酮含量。野生大豆異黃酮含量分布在3896～7440μg/g，平均含量超過(guò)5000μg/g，最大差異達(dá)3544.3μg/g（約1.9倍）;栽培大豆異黃酮含量分布在1463～6116μg/g，平均含量超過(guò)3

4、500μg/g，最大差異可達(dá)4652.9μg/g（約4.2倍）。在此基礎(chǔ)上，遴選出異黃酮含量超過(guò)6000μg/g特異種質(zhì)4份，其中超過(guò)7000μg/g種質(zhì)1份。
　　3.利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析了異黃酮合成途徑相關(guān)基因在不同大豆品種、發(fā)育時(shí)期、組織部位中的表達(dá)差異。其中PAL、C4H、4CL基因在高異黃酮含量大豆品種R2時(shí)期的表達(dá)量顯著高于低異黃酮品種;CHS、IFS在高異黃酮大豆品種R8時(shí)期的表達(dá)量顯著高于低異黃酮品種;CPR