CD40蛋白多肽配體的計(jì)算機(jī)模擬篩選和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、CD40是I型跨膜蛋白，屬與腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族成員。它表達(dá)于許多類型的細(xì)胞表面，包括免疫細(xì)胞，造血細(xì)胞，血管細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞以及一系列腫瘤細(xì)胞。CD40與配體CD40 L相互作用是特異性免疫應(yīng)答及其調(diào)節(jié)過(guò)程中主要的協(xié)同刺激信號(hào)。近來(lái)一些體內(nèi)研究表明，采用CD40單抗可以繞開(kāi)Th細(xì)胞激活CD40通道，引發(fā)細(xì)胞毒性作用殺傷腫瘤細(xì)胞。因此，CD40可以作為一個(gè)治療腫瘤的靶位點(diǎn)，CD40激動(dòng)劑能夠克服腫瘤抗原特異的T細(xì)胞耐受，激活

2、抗原提呈細(xì)胞，產(chǎn)生腫瘤抗原特異性的免疫反應(yīng)，達(dá)到治療腫瘤的效果。 本文采取不同于單抗的思路，研究了CD40L的多肽類似物以達(dá)到模擬或干擾CD40-CD40L的通路。構(gòu)建了多肽數(shù)據(jù)庫(kù)，采用計(jì)算機(jī)模擬篩選技術(shù)進(jìn)行CD40蛋白多肽配體的篩選。從計(jì)算機(jī)篩選結(jié)果中，選擇六條結(jié)合能量最優(yōu)的六肽，通過(guò)一系列結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證多肽配體與CD40的實(shí)際結(jié)合能力。SPR體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明六肽N9能特異地與CD40蛋白結(jié)合。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，N9多肽-脂質(zhì)體

3、復(fù)合物能夠結(jié)合高表達(dá)CD40蛋白的B細(xì)胞。將N9序列突變后，沒(méi)有觀察到結(jié)合信號(hào)，說(shuō)明該多肽配體具有序列特異性。最后我們還研究了N9與CD40結(jié)合后能否啟動(dòng)下游的信號(hào)通路，產(chǎn)生免疫效應(yīng)。N9脂質(zhì)體與樹(shù)突狀細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后，檢測(cè)到共刺激分子CD80、CD86表達(dá)上調(diào)，表明N9能夠激活CD40通路，刺激DC細(xì)胞的成熟。本研究實(shí)現(xiàn)了蛋白多肽配體的計(jì)算機(jī)虛擬篩選平臺(tái)。應(yīng)用該平臺(tái)篩選出CD40蛋白的多肽配體在體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)中能夠模擬CD40L產(chǎn)生