丙型肝炎患者血清抗NS3-NS5天然雙特異性抗體的鑒定及其產(chǎn)生機(jī)制的研究.pdf

1、天然的IgG抗體分子由2條相同的重鏈和2條相同的輕鏈組成，重鏈和輕鏈以及兩條重鏈之間通過(guò)二硫鍵連接，形成四肽鏈結(jié)構(gòu)，呈“Y”型構(gòu)象。一般認(rèn)為，一個(gè)抗體分子含有2個(gè)完全一樣的抗原結(jié)合部位，在結(jié)構(gòu)上和功能上都是對(duì)稱的，即一個(gè)抗體只識(shí)別一種抗原，抗體是單特異性的。
　　 近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)IgG4分子是一種擁有獨(dú)特結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)分子，能在體內(nèi)通過(guò)“半分子交換”形成可同時(shí)結(jié)合2種抗原的天然雙特異性抗體，這挑戰(zhàn)了“一種抗體對(duì)應(yīng)一種抗原”的范式。我

2、們經(jīng)獨(dú)立研究發(fā)現(xiàn)用特定程序免疫兔可以得到針對(duì)2種不同抗原的天然雙特異性抗體，并建立獲取天然雙抗的動(dòng)物模型。而后，我們?cè)陬愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人體內(nèi)鑒定出抗IgG和CCP的天然雙特異性抗體。我們推測(cè)，脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)在同時(shí)接受不相關(guān)抗原的長(zhǎng)期刺激下（如自身免疫性疾病，慢性寄生蟲、細(xì)菌、病毒性感染，腫瘤生長(zhǎng)及其他慢性過(guò)程），易于產(chǎn)生針對(duì)這些抗原的雙特異性抗體。丙型肝炎病毒感染是一種病毒不斷復(fù)制的持續(xù)性感染過(guò)程，研究發(fā)現(xiàn)慢性丙型肝炎病人體內(nèi)長(zhǎng)期存

3、在針對(duì)HCV病毒抗原(Core，NS3，NS4，NS5)的抗體，我們推測(cè)HCV病人血清中可能存在相關(guān)的雙特異性抗體。
　　 本研究的目的是在丙型肝炎患者體內(nèi)鑒定出針對(duì)HCV編碼的不同病毒抗原的天然雙特異性抗體，探討這種雙特異性抗體和丙型肝炎疾病的關(guān)系。在此基礎(chǔ)之上純化該雙特異性抗體，鑒定其IgG亞型，并研究產(chǎn)生機(jī)制。首先，本研究建立抗HCV NS3/NS4、NS3/NS5、NS3/Core雙特異性抗體的雙抗原夾心一生物素鏈霉親和

4、素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法，用該法檢測(cè)91份丙型肝炎陽(yáng)性血清，初步檢測(cè)到抗NS3/NS5天然雙特異性抗體的存在。為確定更大樣本量中NS3/NS5雙特異性抗體的陽(yáng)性分布，將雙特異性抗體陽(yáng)性臨界值(cut-off)設(shè)定為100份健康對(duì)照的雙抗OD均值+8SD，即檢測(cè)OD值大于0.090判為陽(yáng)性，統(tǒng)計(jì)得出354例丙型肝炎病人NS3/NS5雙特異性抗體的陽(yáng)性率為41％(145/354)。我們對(duì)115份雙特異陽(yáng)性血清的NS3/NS5天然

5、雙特異性抗體OD值與丙肝病毒的復(fù)制即RNA拷貝數(shù)的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)二者不存在相關(guān)性，Spearman相關(guān)系數(shù)r=-0.1210，p=0.1977。隨后，我們用競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)和交叉反應(yīng)排除實(shí)驗(yàn)證實(shí)NS3/NS5雙特異性抗體的特異性，并用高分辨率凝膠過(guò)濾層析排除觀察到的雙特異性是由NS3單特異抗體和NS5單特異抗體形成的多聚體造成的可能性。用免疫親和層析方法純化該雙特異抗體失敗，但是通過(guò)Protein G親和柱和免疫磁珠分離法鑒定NS