基于納米薄膜構(gòu)建的電化學免疫傳感器檢測甲胎蛋白(AFP)的新方法研究.pdf

1、腫瘤已經(jīng)成為危害人類健康的高危疾病，甲胎蛋白（AFP）是國際公認的常用的腫瘤標志物，已被廣泛用于肝癌、生殖系統(tǒng)腫瘤和胚胎性腫瘤等疾病的輔助診斷。電化學免疫傳感器基于免疫分析技術，克服了傳統(tǒng)分析技術（如酶聯(lián)免疫分析法等）靈敏度不高等局限性，具備靈敏度高、選擇性好、價格低廉、操作方便等優(yōu)點，在臨床和生物領域具有廣闊的應用前景，已經(jīng)成為了國內(nèi)外研究的熱點之一。本研究提出將電化學免疫傳感器技術應用于 AFP的檢測，而生物活性物質(zhì)在電極表面的有效

2、固定是該檢測新技術的關鍵。本文運用了兩種不同的方法制備納米薄膜修飾電極固定抗體，構(gòu)建新型的電化學免疫傳感器，用于 AFP的檢測，獲得了較滿意的實驗結(jié)果。
　　首先，本文利用電聚合將聚鈣羧酸修飾于電極表面，聚鈣羧酸表面的活性基團（羧基）通過碳化二亞胺試劑（EDC+NHS）將AFP單克隆抗體（Ab1）固定于電極表面，根據(jù)抗體-抗原反應，構(gòu)建檢測AFP的夾心型電化學免疫傳感器。利用掃描電鏡（SEM）、電化學交流阻抗（EIS）和循環(huán)伏安法

3、（CV）等對電極制備過程進行表征，并對實驗條件進行了優(yōu)化。實驗結(jié)果表明，該方法具有較高的靈敏度、較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。在最佳實驗條件下，測定 AFP的檢測范圍為0.5~200ng·mL-1，實驗檢測限為0.5ng·mL-1,相對標準偏差（RSD）為2.6％。
　　此外，本文采用滴涂法將殼聚糖-碳納米管（CS-CNT）納米復合材料修飾在玻碳電極表面，在戊二醛的橋聯(lián)作用下，固定抗體，根據(jù)抗原-抗體反應，構(gòu)建檢測AFP夾心型電化學免疫傳

4、感器。通過循環(huán)伏安法對電極制備過程進行表征，并優(yōu)化實驗條件。實驗結(jié)果表明，該法制備的電化學免疫傳感器具有靈敏度高，選擇性好和穩(wěn)定性高的特點。在最佳優(yōu)化條件下，實驗檢測限為0.05ng·mL-1，其響應信號與AFP抗原濃度在0.05~20 ng·mL-1和20~200 ng·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系，其相對標準偏差（RSD）為9.6%。
　　最后，本研究應用以上兩種不同修飾方法制備的電化學免疫傳感器，對血清樣品的 AFP進行檢