長春地區(qū)PRRSV分離鑒定及其鑒別診斷方法的建立.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一種能夠引起母豬繁殖障礙和仔豬呼吸困難等疾病的RNA病毒。PRRSV被分為歐洲型毒株LV株和美洲型毒株VR-2332株的兩種基因型毒株。本研究中通過細(xì)胞培養(yǎng)成功分離一株毒株P(guān)RRSV長春株命名為CC-13株。CC-13分離株經(jīng)傳代培養(yǎng)至30代，其TCID50穩(wěn)定在10-6.0/0.1mL。

2、　　參考GeneBank中多株P(guān)RRSV代表性毒株基因序列，設(shè)計(jì)合成兩對(duì)特異性引物，分別對(duì)PRRSV CC-13株Nsp2和GP5蛋白基因（ORF5）進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，通過Nsp2部分基因測序以及繪制PRRSV GP5蛋白基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析比較CC-13分離毒株與國內(nèi)外其它毒株的序列同源性和遺傳進(jìn)化關(guān)系，分析結(jié)果表明該分離毒株與國內(nèi)高致病性PRRSV毒株的同源性較高，為美洲型高變異毒株。
　　為了在臨床上快速、有效的區(qū)分高低

3、致病性PRRSV，參考GenBank發(fā)表的代表性毒株，根據(jù)高致病性毒株Nsp2基因上有30個(gè)氨基酸不連續(xù)缺失的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物，擴(kuò)增得到高低致病性PRRSV Nsp2基因的目的條帶長度分別為644bp，734bp，從而將兩者區(qū)分開來。敏感性試驗(yàn)中最低檢測滴度為0.1TCID50。用本方法對(duì)長春及其周邊地區(qū)送檢60份病料進(jìn)行盲檢，檢出10份高致病性PRRSV。并將本方法與N蛋白基因引物RT-PCR診斷方法進(jìn)行比較，結(jié)果均一致，說明