原花青素對氨基脲染毒小鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的：
　　1、觀察原花青素(proanthocyanidins,PC)對氨基脲(semicarbazide,SEM)致小鼠免疫損傷的干預(yù)效果,并比較免疫損傷前、后添加原花青素的干預(yù)效果;
　　2、探討原花青素對氨基脲致小鼠免疫損傷保護(hù)作用的可能機(jī)制,為原花青素的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　80只清潔級成年昆明種(KM)小鼠,雌雄各半,按體重隨機(jī)分為8組,每組10只:溶劑對照組,SEM染毒組,S

2、EM染毒后加低、中、高劑量PC保護(hù)組,低、中、高劑量PC保護(hù)后加SEM染毒組。溶劑對照組用去離子水灌胃;SEM染毒組按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周,再繼續(xù)用去離子水灌胃4周;SEM染毒后加低、中、高劑量PC保護(hù)組,先給3組動(dòng)物均按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周后,再分別按設(shè)計(jì)PC的保護(hù)劑量(100、200、400mg/kg·bw)繼續(xù)灌胃4周;低、中、高劑量PC保護(hù)后加SEM染毒組,先分別給

3、3組動(dòng)物按設(shè)計(jì)PC的保護(hù)劑量(100、200、400mg/kg·bw)灌胃4周,再繼續(xù)分別按56.25 mg/kg·bw SEM溶液灌胃染毒2周。以上各組動(dòng)物灌胃溶液均用去離子水作溶劑,按10ml/kg·bw體積灌胃,連續(xù)灌胃6周,每日1次。
　　末次灌胃24h后,摘眼球采血,制備血清用試劑盒檢測血清中 SOD活力和MDA含量;頸椎脫臼處死小鼠,中性紅法檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能;無菌取脾制備脾細(xì)胞懸液,改良MTT法檢測NK細(xì)胞

4、殺傷活性;溶血空斑法檢測抗體形成細(xì)胞數(shù);MTT法測定T細(xì)胞增殖能力。剪下小鼠左右耳殼并分別取直徑8mm耳片并稱重,計(jì)算腫脹度測定小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH);分離各組小鼠胸腺、脾臟,稱重并計(jì)算臟器系數(shù);常規(guī)病理學(xué)切片,HE染色觀察脾臟組織形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1、SEM染毒組小鼠體重增長低于溶劑對照組(P<0.05);低、中、高劑量PC先保護(hù)組小鼠體重增長分別高于PC后保護(hù)組,高劑量PC組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.

5、05)。
　　2、SEM染毒組小鼠脾臟、胸腺臟器系數(shù)與溶劑對照組比較降低(P<0.05);中、高劑量 PC后保護(hù)組小鼠脾臟臟器系數(shù)高于 SEM染毒組(P<0.05);低、中、高劑量PC先保護(hù)組小鼠胸腺臟器系數(shù)分別高于同劑量PC后保護(hù)組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　3、脾臟病理組織學(xué)觀察顯示:溶劑對照組脾臟組織被膜完整光潤,脾小體結(jié)構(gòu)完整,紅、白髓分界清楚,數(shù)目正常,紅髓的脾索、脾竇排列正常,白

6、髓的生發(fā)中心清楚,動(dòng)脈周圍淋巴細(xì)胞正常;SEM染毒組脾小體結(jié)構(gòu)破壞,紅、白髓分界不清,數(shù)目減少,脾索、脾竇排列紊亂,生發(fā)中心和邊緣區(qū)模糊,動(dòng)脈周圍淋巴細(xì)胞減少;PC后保護(hù)組脾臟的形態(tài)較SEM染毒組有所改善,且隨 PC劑量的加大改善愈明顯,脾小體機(jī)構(gòu)趨完整,紅白髓分界趨清楚,數(shù)目增多,生發(fā)中心趨明顯,動(dòng)脈周圍淋巴細(xì)胞數(shù)目漸趨增加;PC先保護(hù)組脾臟的脾小體結(jié)構(gòu)、生發(fā)中心和動(dòng)脈周圍淋巴細(xì)胞數(shù)量改善較PC后保護(hù)組效果更明顯。
　　4、與溶

7、劑對照組相比,SEM染毒組小鼠NK細(xì)胞活性降低(P<0.05);與SEM染毒組比較,中、高劑量 PC后保護(hù)組小鼠 NK細(xì)胞活性有所提高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);中、高劑量PC先保護(hù)組小鼠NK細(xì)胞活性與同劑量PC后保護(hù)組比較均有所升高(P<0.05),并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　5、SEM染毒組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對中性紅的吞噬能力與溶劑對照組比較有所降低(P<0.05);中、高劑量 PC后保護(hù)組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對中性紅的吞噬能

8、力與SEM染毒組相比有所提高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與同劑量PC組相比,PC先保護(hù)組和PC后保護(hù)組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對中性紅的吞噬能力無顯著差別(P>0.05)。
　　6、SEM染毒組與溶劑對照組比較可降低小鼠抗體形成細(xì)胞數(shù)(P<0.05);中、高劑量 PC后保護(hù)組與 SEM染毒組相比小鼠抗體形成細(xì)胞數(shù)升高(P<0.05);中、高劑量PC先保護(hù)組與同劑量PC后保護(hù)組比較可提高小鼠抗體形成細(xì)胞數(shù)(P<0.05)。
　

9、　7、與溶劑對照組相比, SEM染毒組可降低小鼠淋巴細(xì)胞增殖力(P<0.05);中、高劑量PC后保護(hù)組與SEM染毒組相比,小鼠淋巴細(xì)胞增殖力有所提高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);中、高劑量PC先保護(hù)組小鼠淋巴細(xì)胞增殖力比同劑量PC后保護(hù)組均明顯提高(P<0.05)。
　　8、SEM染毒組與溶劑對照組比較可降低小鼠左右耳片腫脹度(P<0.05);PC后保護(hù)組與SEM染毒組相比小鼠左右耳片腫脹度升高(P<0.05);PC先保護(hù)組

10、小鼠左右耳片腫脹度和同劑量 PC后保護(hù)組相比均有所提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　9、與溶劑對照組相比,SEM染毒組小鼠血清SOD活性代償性升高,MDA含量升高(P<0.05);中、高劑量 PC后保護(hù)組與 SEM染毒組相比,小鼠血清SOD活性升高(P<0.05),MDA含量有所降低(P<0.05);中、高劑量PC先保護(hù)組小鼠血清 SOD活性與同劑量 PC后保護(hù)組相比均有所升高(P<0.05),MDA含量均明顯降低(P