2，3，7，8-四氯二苯并二噁英所致先天性腎積水的發(fā)生機(jī)制及其預(yù)防的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzodioxin，TCDD）所致先天性腎積水的發(fā)生機(jī)制，以及槲皮素對(duì)先天性腎積水的預(yù)防作用。 方法：1.利用TCDD誘導(dǎo)建立小鼠先天性腎積水動(dòng)物模型。在C57BL/6J孕鼠第12個(gè)妊娠日（gestational day，GD），實(shí)驗(yàn)組以TCDD（25μg/kg）灌胃，對(duì)照組以玉米油灌胃。GD18，統(tǒng)計(jì)胎鼠數(shù)及存活率；解剖胎鼠，觀察畸形發(fā)生

2、情況。對(duì)孕鼠及胎鼠的各主要臟器進(jìn)行組織學(xué)檢查，并對(duì)胎鼠的腎臟及輸尿管進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察。 2.采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法探討TCDD致小鼠先天性腎積水的分子機(jī)制。GD12，TCDD組C57BL/6J孕鼠以TCDD（25μg/kg）灌胃，對(duì)照組孕鼠以玉米油灌胃。GD18，取胎鼠上尿路，提取組織總蛋白，進(jìn)行雙向凝膠電泳，圖像分析兩組間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，將差異明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析后于數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索鑒定，并應(yīng)用免疫組化方法對(duì)鑒定出的蛋白

3、質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。體外培養(yǎng)GD12的胎鼠泌尿系統(tǒng)，Prx1組加peroxiredoxin1（Prx1）蛋白（終濃度為1：100），對(duì)照組加等量培養(yǎng)基，培養(yǎng)6天后，進(jìn)行組織學(xué)檢查，了解輸尿管粘膜上皮增殖情況及輸尿管管腔有無(wú)狹窄。 3.觀察槲皮素對(duì)小鼠先天性腎積水的預(yù)防作用。GD12，C57BL/6J孕鼠隨機(jī)分為四組：對(duì)照組以玉米油灌胃，TCDD組以TCDD（25μg/kg）灌胃，槲皮素組以槲皮素（100 mg/kg）灌胃，TCDD+槲皮

4、素組以槲皮素（100 mg/kg）及TCDD（25μg/kg）灌胃。GD18，統(tǒng)計(jì)胎鼠數(shù)及存活率，檢查畸形發(fā)生情況，并留取胎鼠泌尿系統(tǒng)作組織學(xué)觀察及免疫組化檢測(cè)。 結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)組胎鼠雙側(cè)腎積水及上段輸尿管積水發(fā)生率為100％（3級(jí)腎積水為86.2％，4級(jí)腎積水為13.8％）。實(shí)驗(yàn)組胎鼠腎間質(zhì)纖維化，中下段輸尿管粘膜移行上皮增生，管腔變窄，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，結(jié)構(gòu)模糊，可見(jiàn)膜性結(jié)構(gòu)破裂，輸尿管上皮細(xì)胞核大，核仁明顯，靠邊，染色質(zhì)

5、豐富，常染色質(zhì)發(fā)達(dá)，異染色質(zhì)少。對(duì)照組胎鼠腎臟及輸尿管未見(jiàn)異常。實(shí)驗(yàn)組胎鼠腎積水發(fā)生率高于對(duì)照組（P<0.01）。 2.經(jīng)雙向電泳、質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)后，最終在腎積水胎鼠上尿路中鑒定出12種表達(dá)增強(qiáng)的蛋白質(zhì)，分別是：Prx1蛋白、鈣粘蛋白6、γ-肌動(dòng)蛋白、根蛋白、結(jié)蛋白、Ⅱ型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體、嗜鉻顆粒蛋白B、血清白蛋白前體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、假說(shuō)蛋白LOC70984、Lipk蛋白和鋅指蛋白336。免疫組化結(jié)果顯示，Prx1蛋白在腎積

6、水胎鼠輸尿管粘膜上皮表達(dá)增強(qiáng)。經(jīng)體外培養(yǎng)6天后，與對(duì)照組相比，Prx1組輸尿管粘膜上皮增生明顯，上皮層增厚，輸尿管管腔狹窄（P<0.01）。 3.槲皮素對(duì)小鼠先天性腎積水的預(yù)防作用。各組孕鼠每日體重增長(zhǎng)無(wú)顯著差異（P>0.05），一般情況正常，無(wú)流產(chǎn)及早產(chǎn)，產(chǎn)仔數(shù)無(wú)顯著差異（P>0.05）；各組胎鼠體重?zé)o顯著差異（P>0.05），均為活胎，無(wú)死胎及吸收胎。對(duì)照組及槲皮素組胎鼠無(wú)腎盂及上段輸尿管積水發(fā)生。TCDD組胎鼠雙側(cè)腎盂及上

7、段輸尿管積水發(fā)生率為100％（3級(jí)腎積水84.1％，4級(jí)腎積水15.9％），TCDD+槲皮素組為13.4％（均為3級(jí)腎積水），差異具有顯著性（P<0.05）。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：對(duì)照組與槲皮素組胎鼠輸尿管粘膜上皮Prx1蛋白均呈陰性表達(dá)；在TCDD組及TCDD+槲皮素組具有腎積水的胎鼠輸尿管粘膜上皮呈陽(yáng)性表達(dá)。TCDD組胎鼠輸尿管粘膜上皮Prx1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（100％）高于TCDD+槲皮素組（13.4％），差異具有顯著性（P<0.0

8、5）。 結(jié)論：1.TCDD誘導(dǎo)出的C57BL/6J胎鼠雙側(cè)腎積水動(dòng)物模型在病理學(xué)表現(xiàn)上與人類(lèi)腎盂輸尿管連接處梗阻（ureteropelvic junction obstruction，UPJO）相似，適用于UPJO的病因?qū)W及發(fā)病機(jī)制等方面的研究。 2.TCDD致胎鼠腎積水的分子機(jī)制與Prx1蛋白密切相關(guān)：TCDD通過(guò)誘導(dǎo)胎鼠氧化應(yīng)激，使Prx1蛋白反應(yīng)性升高以對(duì)抗氧化應(yīng)激，同時(shí)刺激輸尿管粘膜上皮增生，致使其管腔變窄，產(chǎn)生