黃連湯抗鴨疫里氏桿菌內(nèi)毒素的活性成分初步分析.pdf

1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer, RA)是一種革蘭氏陰性短桿菌,引起鴨疫里默氏桿菌病,多種禽類對該病易感,對養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展也是一個巨大的威脅。RA的血清型眾多,且各血清型間缺乏交叉保護能力,因而免疫預防效果不佳?？股仡愃幬飳υ摬【哂幸欢ǖ闹委熜Ч?但畜禽易產(chǎn)生耐藥性。中藥對RA的防治效果良好,無耐藥性,無藥物殘留問題。RA的主要致病因子是內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide, LPS)。前期研究

2、篩選出由黃連、黃柏、甘草按一定比例配伍而成的黃連湯水煎劑對RA的體內(nèi)外拮抗作用均有良好效果。本論文選用系統(tǒng)溶劑法對黃連湯進行化學部位分離,綜合比較黃連湯各化學部位的抗LPS作用效果。
　　取黃連、黃柏、甘草,按1:1:2比例配伍,采用水提醇沉法,獲得含生藥濃度為174.0 g/L的黃連湯水提部位。根據(jù)此藥液倍比稀釋,配成含生藥87×20、87×2-1、87×2-2、87×2-3、87×2-4、87×2-5、87×2-6、85.7×

3、2-7、87×2-8、87×2-9 g/L等10個濃度的黃連湯水提部位稀釋液。
　　采用藥敏紙片法和試管體外抑菌法研究黃連湯水提部位體外抗RA的效果。取上述制備的黃連湯水提部位藥液各200μL制備藥敏紙片。藥敏紙片結(jié)果顯示88×2-5 g/L以上稀釋度組無抑菌圈,88×20 g/L組的抑菌圈最大,半徑達約1.1 cm。試管法顯示87×2-1 g/L濃度藥物組的菌液最清亮。EeCrd藥液的體外抗RA效果明顯。
　　取各濃度Ee

4、Crd藥液200μL與10μL從RA用酚水法提取的LPS在恒溫振蕩培養(yǎng)箱中,37℃、200 r/min,孵育11 h后,用顯色基質(zhì)鱟試劑法進行檢測,觀察EeCrd藥液的抗LPS效果。結(jié)果顯示,隨著藥物濃度的增加LPS的破壞量增多。藥物濃度為87×2-1 g/L的組別,LPS幾乎被全部破壞。
　　取黃連湯水提醇沉部位依次用正己烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇微波萃取,減壓濃縮至干得正己烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物三個不同極性部位