選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑尼美舒利對肝癌細胞VEGF和MMPs的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤之一，手術(shù)目前是肝癌治療的最佳選擇，但由于原發(fā)性肝癌多合并有肝硬化且病情發(fā)展迅速，患者就診時多已失去手術(shù)機會。因此，綜合治療仍是不能手術(shù)切除的肝癌的主要治療手段。藥物治療在肝癌的綜合治療中占有重要地位，已成為肝癌治療中不可缺少的一部分。由于傳統(tǒng)化療藥物存在復(fù)發(fā)率高、敏感性低、易產(chǎn)生多耐藥性等缺點而效果不佳，因此尋找新的藥物對于肝癌治療有著重要的意義。 環(huán)氧化酶(cycloxygenase，C

2、OX)，又稱前列腺素內(nèi)源性過氧化物酶，是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素(prostaglandins，PGs)的關(guān)鍵酶，目前認為，COX有COX-1和COX-2兩種同功異構(gòu)體。COX-1是一種組成型酶，在許多組織中表達，并參與細胞正常的生理功能；而COX-2為一種誘導(dǎo)型酶，靜息時不表達，只有在細胞因子、腫瘤劑及癌基因等促分裂劑刺激下才產(chǎn)生。近來，在胃、結(jié)腸癌及肝癌發(fā)現(xiàn)有COX-2的高表達并且和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。另外，大量的證據(jù)表明非甾

3、體類抗炎藥(nonsteroidalanti-inflammatorydrugs，NSAIDs)在腫瘤的發(fā)展過程可以起到有效的阻止作用。 最近的研究表明COX-2的過表達可以誘導(dǎo)腫瘤的血管生成和轉(zhuǎn)移，然而其機制仍不清楚。人們已在多種腫瘤內(nèi)發(fā)現(xiàn)有血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的存在，體內(nèi)外的實驗表明血管內(nèi)皮生長因子能夠促進血管的生成，其已成為治療腫瘤優(yōu)先的考慮的靶點。腫

4、瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程包括降解細胞外基質(zhì)，其中主要是降解由Ⅳ型膠原組成的基底膜?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetaloproteinases，MMPs)一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，它們共同作用是可降解所有的細胞外基質(zhì)成分。其中，明膠酶A(MMP-2)和明膠酶B(MMP-9)因為能夠降解Ⅳ/Ⅴ型膠原而受到重視，大量研究證實明膠酶和腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。 我們研究了選擇性COX-2抑制劑尼美舒利對肝癌細胞SMMC-7721生長及其分泌的血

5、管內(nèi)皮生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶和前列腺素E2(PGE2)的影響，探討選擇性COX-2抑制劑對肝癌血管生成、侵襲的影響及可能的作用機制，為肝癌的治療提供新的理論依據(jù)。 目的：研究選擇性COX-2抑制劑尼美舒利對肝癌細胞SMMC-7721生長及其分泌的血管內(nèi)皮生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶活性的影響，并探討COX-2抑制劑的作用途徑。 方法：(1)細胞增殖抑制實驗(MTT法)：檢測尼美舒利對SMMC-7721細胞增殖的抑制作用。

6、 (2)放射免疫實驗；檢測尼美舒利對SMMC-7721細胞分泌PGE2的影響。 (3)RT-PCR實驗：觀察人肝癌細胞SMMC-7721細胞分泌的VEGF和MMP-2、MMP-9mRNA表達情況，尼美舒利作用后VEGF和MMP-2、MMP-9mRNA量的變化。 (4)ELISA實驗：觀察人肝癌細胞SMMC-7721細胞分泌的VEGF的蛋白含量及尼美舒利作用后VEGF蛋白含量的變化。 (5)明膠酶譜實驗：分析

7、尼美舒利對SMMC-7721細胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶活性的影響。 結(jié)果：(1)MTT實驗結(jié)果顯示，隨著尼美舒利作用時間的延長和濃度的增加，肝癌細胞SMMC-7721的增殖抑制作用越來越明顯，呈良好的劑量和時間依賴性。 (2)放免檢測顯示，隨著尼美舒利濃度的增加，PGE2的釋放量明顯下降，與對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，提示COX-2活性受到抑制。 (3)不同濃度尼美舒利作用于SMMC-7721細胞后，VE

8、GFmRNA和蛋白的表達均下降，其抑制作用隨藥物濃度的增大而增強，呈劑量依賴性(P＜0.05)。 (4)在SMMC-7721細胞中可以檢測到MMP-2、MMP-9mRNA的表達，隨著尼美舒利作用濃度的增加，MMP-2，MMP-9mRNA表達均有下降且其活性降低，與對照組比較下有顯著差異(P＜0.05)。 結(jié)論：(1)COX-2抑制劑尼美舒利對肝癌細胞的增殖有抑制作用，呈劑量和時間依賴性。尼美舒利能降低COX-2的下游產(chǎn)物