馬凡綜合征植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)初步研究.pdf

1、【背景】馬凡綜合征是一常染色體顯性遺傳性病,主要累及纖維結(jié)締組織,其病變的微纖維主要牽累三個(gè)組織器官系統(tǒng):骨骼、眼和心血管,患者常因心血管因素致死,雜合子患者有50％的可能性將這種疾病遺傳給后代,希望通過輔助生殖技術(shù)來避免患兒的出生。1978年英國(guó)劍橋的Steptoe和Edwards教授通力合作,應(yīng)用體外受精-胚胎移植技術(shù)孕育了世界上第一例“試管嬰兒”。30多年來,隨著生殖醫(yī)學(xué)及其相關(guān)學(xué)科研究的不斷深入,輔助生殖技術(shù)應(yīng)用日漸廣泛,植入前

2、遺傳學(xué)診斷逐漸推廣,減少了基因類疾病的遺傳,實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。
　　【目的】初步建立馬凡綜合征的胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)體系。
　　【方法】
　　1.通過對(duì)一例馬凡綜合征患者家系進(jìn)行調(diào)查,找到致病突變位點(diǎn)及其在家系的遺傳情況。
　　2.對(duì)已經(jīng)證實(shí)為馬凡綜合患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞和行IVF/ICSI后夫妻雙方同意捐獻(xiàn)的異常受精和發(fā)育不良的廢棄胚胎,進(jìn)行外周血單細(xì)胞,單卵裂球及MⅡ卵母細(xì)胞應(yīng)用MDA方法進(jìn)行全基因組擴(kuò)增,

3、并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行已知突變位點(diǎn)的特異性PCR,產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,分析測(cè)序結(jié)果,探討單細(xì)胞水平進(jìn)行突變位點(diǎn)檢測(cè)的可行性。
　　3.利用患者自身的SNP和STR位點(diǎn)分析,找到與突變位點(diǎn)連鎖的多態(tài)性遺傳學(xué)標(biāo)記。
　　【結(jié)果】
　　1.本例馬凡綜合征患者的突變位點(diǎn)為一新生突變c.2647T>C(Trp883Arg)。
　　2.其外周血單細(xì)胞WGA產(chǎn)物進(jìn)行PCR后測(cè)序可以測(cè)出與患者外周血DNA測(cè)序發(fā)病位點(diǎn)一致的堿基突變。非馬凡綜

4、合征患者胚胎的單卵裂球及MⅡ卵母細(xì)胞未測(cè)得相應(yīng)的堿基突變。
　　3.可以采用患者自身的SNP位點(diǎn)及D15S123,D15S978和D15S1028三個(gè)STR位點(diǎn)作為遺傳連鎖標(biāo)記。
　　【結(jié)論】
　　1.通過對(duì)本例馬凡綜合征患者的家系調(diào)查,發(fā)現(xiàn)本患者的突變極有可能為一新生突變。對(duì)于新生突變的多態(tài)性連鎖標(biāo)記尋找需要依靠單倍型分析。
　　2.本研究為探討馬凡綜合征PGD的可行性,根據(jù)單基因遺傳病PGD常用的遺傳學(xué)與分子