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1、目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 VEGF-165的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞株(hMSCs)并檢測經(jīng)基因轉(zhuǎn)染后外源基因的表達,為進一步研究利用hVEGF基因轉(zhuǎn)染的hMSCs 在心肌梗塞動物模型中作用打下基礎(chǔ)。 方法:首先是hVEGF165 和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcPGK- hVEGF 165的構(gòu)建,利用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染hMSCs,然后進行陽性細(xì)胞克隆篩選,用RT-PCR、 Real time PCR、Western Blot、 ELI
2、SA 的方法檢測 hVEGF165在hMSCs中的表達。 結(jié)果:擴增VEGF后成功構(gòu)建質(zhì)粒 pcPGK-hVEGF165,并利用脂質(zhì)體順利轉(zhuǎn)染進hMSCs,并篩選穩(wěn)定表達的細(xì)胞株。RT-PCR、 Real time PCR檢測結(jié)果顯示在MSCs(VEGF165)表達的VEGF165信使RNA明顯高于對照及未轉(zhuǎn)染的hMSCs,而Western Blot、ELISA檢測結(jié)果顯示hMSCs(VEGF165)細(xì)胞及培養(yǎng)上清中的VEGF蛋
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