可溶性殼聚糖季銨鹽(CSTM)的合成、表征及其在基因載體和MR分子探針中的應(yīng)用.pdf

1、為篩選具有更佳性能的納米粒載體材料，本課題對天然可生物降解高分子材料--殼聚糖進行結(jié)構(gòu)修飾，以修飾產(chǎn)物殼聚糖季銨鹽（CSTM）、殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸（CSTM-g-PEG-FA/pDNA）為材料制備了載基因納米粒和CSTM/TPP-SPIO MR分子探針并對其特性進行了系列研究。
　　 本課題第一部分完成了殼聚糖季銨鹽和殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸納米材料的制備。首先將殼聚糖與甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨反應(yīng)，將

2、殼聚糖修飾成可溶性殼聚糖季銨鹽，然后在此基礎(chǔ)上進一步用葉酸和PEG來修飾殼聚糖季銨鹽得到CSTM-g-PEG-FA。用IR和1H-NMR對聚合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，TM和PEG-FA的特征峰明顯。
　　 本課題第二部分進行了殼聚糖季銨鹽-g-聚乙二醇-葉酸載基因納米粒的制備及形態(tài)學表征。首先采用自組裝法制備了CSTM/pDNA納米復合物和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米復合物，然后通過不同介質(zhì)溶液、有無血清、不同N/P等因素對

3、兩納米復合物的粒徑和zeta電位分別進行考察，實驗結(jié)果證明在水溶液中能夠得到粒徑在200nm以內(nèi)、粒徑分布均勻、形態(tài)圓整、zeta電位高的納米復合物。凝膠阻滯實驗中發(fā)現(xiàn)，當聚合物/pNDA的N/P大于等于5時，兩種納米復合物都能完全包裹pNDA，而且兩種殼聚糖衍生物都能很好保護pNDA不受酶降解。
　　 本課題第三部分從細胞毒性和轉(zhuǎn)染效率兩個方面進行了兩種納米復合物的體外細胞實驗。選擇葉酸受體高表達的293T細胞株，通過MTT比

4、色法測定兩種殼聚糖衍生物以及兩種納米制劑的細胞毒性，結(jié)果顯示無論是兩種殼聚糖衍生物還是兩種納米制劑的細胞存活率均在70％以上，說明合成的CSTM和CSTM-g-PEG-FA材料具有良好的安全性。在細胞轉(zhuǎn)染實驗中，CSTM/pDNA納米粒和CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒都有較高的轉(zhuǎn)染效率，且CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒的轉(zhuǎn)染效率要高于CSTM/pDNA納米粒，證明CSTM-g-PEG-FA/pDNA納米粒具有一定

5、的細胞靶向性。
　　 本課題第四部分制備了CSTM/TPP-SPIO分子探針。采用凝聚法制備CSTM/TPP空白納米粒，然后與SPIO結(jié)合生成CSTM/TPP-SPIO分子探針。CSTM/TPP-SPIO分子探針的粒徑在200～280nm之間，zeta電位在10.0～16.0mv之間。SPIO的包封率在80％以上。
　　 本課題第五部分進行了CSTM/TPP-SPIO分子探針的體外毒性實驗和動物體內(nèi)淋巴結(jié)病變定性診斷實驗