銀杏黃酮苷元對ox-LDL誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及對P53、Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討銀杏黃酮苷元（Ginkgo flavone Aglycone，GA）對氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，ox-LDL）誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及對P53、Bcl-2表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Aortic Endothelial Cells，HAECs），將細(xì)胞隨機(jī)分為以下組別：（1）空白對照組：無血清高糖培養(yǎng)基（Dulbe

2、cco’s Modified Eagle’s Medium，DMEM）（2）150mg/L ox-LDL損傷組：150mg/L濃度ox-LDL與細(xì)胞共同培養(yǎng)24h；（3）NF-κB抑制劑組（Pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）：40μmol/L PDTC與細(xì)胞預(yù)先培養(yǎng)1h，然后加入150mg/L ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24h。（4）GA各濃度組：不同濃度GA（7.5、15、30、60mg/L）分別與細(xì)胞培養(yǎng)1h

3、，而后加入150mg/L ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24h；采用倒置顯微鏡及熒光Hoechst33258染色觀察各組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞儀（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測細(xì)胞凋亡率；實(shí)時熒光定量PCR檢測內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 P53和Bcl-2 mRNA的表達(dá)；
　　結(jié)果：1. GA抑制ox-LDL誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡
　　(1)倒置相差顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化：

4、與空白對照組比較，ox-LDL損傷組的內(nèi)皮細(xì)胞圓縮，細(xì)胞間隙增寬，有少量細(xì)胞脫落懸浮于培養(yǎng)液中；與ox-LDL損傷組比較，GA各濃度干預(yù)組細(xì)胞損傷減輕，皺縮細(xì)胞減少，細(xì)胞間隙變窄。
　　(2) Hoechst33258染色熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，ox-LDL損傷組細(xì)胞出現(xiàn)大量的核呈濃染致密的固縮形態(tài)或顆粒狀熒光的凋亡細(xì)胞；與ox-LDL損傷組比較，GA預(yù)處理組隨著濃度升高，人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞核呈濃染致密的固縮形

5、態(tài)或顆粒狀熒光的細(xì)胞數(shù)明顯減少，大部分細(xì)胞染色質(zhì)呈彌漫均勻的低強(qiáng)度熒光。
　　(3)流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示：與正常對照組相比，ox-LDL損傷組細(xì)胞凋亡率(24.75±0.40)％明顯增加（P＜0.01），而不同濃度（7.5～60mg/L）GA干預(yù)處理組較ox-LDL損傷組細(xì)胞凋亡率明顯降低，分別為(23.49±0.45)%，(22.35±0.30)%，(16.90±0.36)%，(13.66±0.41)%，NF-κB抑制劑預(yù)處理組細(xì)

6、胞凋亡率(16.56±0.28)%較ox-LDL損傷組細(xì)胞凋亡率明顯降低（P＜0.01），與30mg/L GA組之間的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　2. GA抑制 ox-LDL誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)
　　實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示，與正常對照組相比，ox-LDL損傷組可顯著升高人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞P53 mRNA表達(dá)，降低Bcl-2 mRNA表達(dá)（P<0.01）。與ox-LDL損傷組相比，

7、不同濃度GA干預(yù)處理組，均可降低人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞P53 mRNA表達(dá)，升高Bcl-2 mRNA表達(dá)，且有一定濃度依賴性（P<0.01）。與不同濃度GA干預(yù)處理組相比，NF-κB抑制劑預(yù)處理組也可下調(diào)P53基因表達(dá)，上調(diào)Bcl-2基因表達(dá)（P<0.01）。
　　結(jié)論：GA對ox-LDL誘導(dǎo)HAECs凋亡具有劑量依賴性拮抗作用；GA和NF-κB抑制劑對ox-LDL誘導(dǎo)HAECs凋亡的抑制作用可能與其下調(diào)P53基因表達(dá)，上調(diào)Bcl-2基