miR-21調(diào)控大鼠BMSCs向肌成纖維細(xì)胞分化的機(jī)制研究.pdf

1、研究報(bào)導(dǎo)放療誘導(dǎo)的纖維萎縮機(jī)制在放射性頜骨壞死中起重要作用，但具體的調(diào)控機(jī)制尚不明確。通過(guò)多種纖維化疾病研究的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)miR-21與TGF-β1在纖維化過(guò)程中參與調(diào)控作用，因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的過(guò)程，探討 miR-21是否調(diào)控了TGF-β1對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)分化過(guò)程。此研究有望深入闡述放射性頜骨壞死中頜骨纖維萎縮機(jī)制的具體調(diào)控機(jī)制，為進(jìn)一步治療和預(yù)防提供新靶點(diǎn)。
　　目的：檢

2、測(cè)TGF-β1誘導(dǎo)大鼠BMSCs成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞分化過(guò)程中miR-21的基因表達(dá)，同時(shí)探討miR-21在體外大鼠BMSCs成纖維細(xì)胞分化過(guò)程中的調(diào)控作用。為治療頜骨纖維化提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。
　　方法：1.原代獲得大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞，并進(jìn)行分離純化培養(yǎng)。并用一定濃度的TGF-β1對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。2. Real-time PCR檢測(cè)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中miR-21基因表達(dá)

3、水平差異。3.利用miR-21基因模擬物mimics和inhibitor對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其過(guò)表達(dá)或者下調(diào)，Real-time PCR和Western blot檢測(cè)肌成纖維細(xì)胞的相關(guān)基因和蛋白α-SMA的表達(dá)，觀察 miR-21對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)影響。3. miR-21基因的mimics模擬物轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞后，加入一定濃度的TGF-β1，Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)肌成纖維細(xì)胞的相關(guān)蛋白α

4、-SMA的表達(dá)，從而明確miR-21對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的調(diào)控作用是否與TGF-β1通路相關(guān)。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一定濃度的TGF-β1可以誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，在此過(guò)程中miR-21基因的表達(dá)上調(diào)，并且具有時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性。一定濃度的TGF-β1處理后miR-21表達(dá)升高且在處理后的48h表達(dá)量達(dá)到最高峰值。當(dāng)TGF-β1的濃度為5ng/ml時(shí)，miR-21的表達(dá)最高。人工合成的miR-

5、21 mimics轉(zhuǎn)染至大鼠BMSCs后能夠有效提高miR-21表達(dá)量從而促進(jìn)了細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá)，而人工合成的miR-21 inhibitor轉(zhuǎn)染后能夠有效下調(diào)miR-21表達(dá)量從而降低了細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá)；miR-21 mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纖維細(xì)胞分化的作用，表明miR-21為促纖維化的基因。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)，miR-21能夠正調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)