硝酸銀對角朊細胞增殖的作用.pdf

1、目的:探討低濃度硝酸銀對體外培養(yǎng)角朊細胞增殖的影響。
　　 方法:建立HaCaT（人KC細胞株）角朊細胞的體外培養(yǎng)模型，分別于接種細胞貼壁后，隨機分為(1)對照組，不添加藥物試劑;(2) AgNO3一組，培養(yǎng)基中添加終濃度為1×10-5mol/l AgNO3;(3) AgNO3二組，培養(yǎng)基中添加終濃度為1×10-6mol/l AgNO3;(4) CFTRinh-172抑制劑組，培養(yǎng)液中添加終濃度為10umol/ml CFTRin

2、h-172溶液。每24h更換相應藥物濃度的培養(yǎng)液。并在細胞貼壁后即刻、24h、36h、48h、72h、84h、96h進行每組OD測量。24h及48h進行MQAE染色，利用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測細胞內(nèi)氯離子熒光含量，DAPI染色后，免疫熒光顯微鏡檢測。
　　 結果:HaCaT細胞接種2小時后，細胞沉降至培養(yǎng)板內(nèi)底部，各實驗組間的基礎OD均值(P＞0.05)，隨后添加硝酸銀組較其他組OD值高(P＜0.05)，生長曲線提示，添加硝酸銀實驗

3、組HaCaT細胞呈指數(shù)生長，約在72H后達生長平臺期，較其他兩組有明顯促進作用，添加終濃度為10umol/l的CFTRinh-172溶液實驗組細胞生長較其他三組慢。添加不同濃度的AgNO3對細胞生長有明顯的促進作用，添加終濃度為10μmol/ml的CFTRinh-172溶液實驗組細胞生長較其他三組慢(P＜0.05)。添加硝酸銀組中熒光強度明顯強于對照組及抑制劑組，說明細胞內(nèi)部Cl-含量明顯下降，48h后各組細胞內(nèi)熒光強度進一步增強，提示

4、細胞內(nèi)氯離子外流增加。在無鈣改良RPMI1640培養(yǎng)液中添加不同濃度的AgNO3離體培養(yǎng)HaCaT細胞，其HaCaT細胞外流氯離子濃度明顯高于CFTRinh-172抑制劑組(P＜0.05)和對照組(P＜0.05);本實驗中兩種濃度的AgNO3實驗組沒有顯著性差異(P＞0.05); CFTRinh-172抑制劑組HaCaT細胞內(nèi)氯離子濃度明顯高于對照組(P＜0.05)。HaCaT細胞經(jīng)MQAE孵育染色及DAPI染色下，細胞漿呈淡綠色熒光反